决定乙肝治疗是否有效的新型检测方法分析大全

原先的干扰素和NA类药物试验以生化学，病毒学，血清学和病理学终点来评估有效性，而更近期的试验已经专注于病毒学和血清学终点，因为这些终点已经显示出跟临床结局的改善有相关性。

在概念验证研究中可能需要肝组织活检查来确认新的作用模式和/或验证抗病毒活性的非侵入性替代标记物。

血清 HBsAg 方法

HBsAg消失被列为新型抗病毒和免疫调节疗法的phase 3期试验的最重要的疗效终点。有些专家建议需要更敏感的 HBsAg 方法。另外专家则指出，血清中HBsAg水平的持续存在可能不是来自持续的cccDNA转录，而是来自整合的HBV DNA基因组。现在需要一种可以区分源自整合HBV DNA的HBsAg还是源自ccc DNA的检测方法。

在血清中不能检测到HBsAg并不代表着就关闭了HBsAg的产生，因为循环的HBsAg可能与抗HBs以复合物的形式存在。乙型肝炎病毒产生空白包膜颗粒，其病毒粒子数可能超过1，000倍。可以区分病毒体中的表面蛋白与亚病毒颗粒（大，中，小HBsAg蛋白）的方法将是有益的。

血清HBsAg的下降可能被用来作为早期诊断试验的疗效，尽管其预测HBsAg消失的准确性尚未确定。定量HBsAg测定也可用于疾病阶段分类和预后。过去十年来，欧洲和亚洲已经有几种标准化的定量HBsAg检测方法可以使用，而且已就它们将成为新药开发的重要工具达成共识。

cccDNA定量和转录活性

许多正在开发中新型抗病毒药物旨在增强cccDNA的清除或降解或表观遗传修饰cccDNA转录。可靠地检测cccDNA浓度和/或其转录活性的测定方法将有助于直接评估这些新药的疗效，并且在概念验证研究中是非常宝贵的。目前还没有标准化肝内cccDNA检测方法。

然而，有一个共识是，需要适当的肝组织样本，并且需要确保特异性的适当检测措施，特别是存在丰富松弛环状DNA的情况下。

临床试验中非常期望能有作为替代肝内cccDNA可靠的血清标志物的测定。几项研究表明，血清HBsAg水平与肝脏cccDNA的相关性要比血清HBV DNA水平更好，这表明它是cccDNA的间接标记物。

然而，这种相关性在HBeAg阳性患者中是满意的，而在HBeAg阴性患者中则相对次优。HBsAg可从转录自cccDNA或整合HBV DNA的亚病毒RNA翻译。

有人提出，HBsAg主要来源于HBeAg阳性患者的cccDNA，而HBeAg阴性人群中增加的部分主要衍生自整合HBV DNA。近期的研究提示血清 HBV RNA和HBcrAg水平可能比HBsAg水平更可靠地代替肝脏cccDNA。

血清HBV RNA方法

绝大多数循环的HBV病毒颗粒含有部分双链的松弛环状DNA；然而，现已报道了含有HBV RNA的循环“病毒颗粒”。这些包含RNA的“病毒颗粒”在接受NA治疗的患者中更丰富，可能是由于NA抑制pgRNA的逆转录导致衣壳pgRNA的积累，其中一些可能被包围和分泌。

因此，在接受NA治疗的患者中，在血清HBV DNA已经检测不到的情况下检测血清中的HBV RNA可以推测正在进行的cccDNA转录，并且其已被证明是停止NA治疗后病毒复发的预测因子。

血清HBV RNA水平的测定，特别是如果它们对pgRNA具有特异性，可能为转录活性cccDNA提供有用的替代物。

血清HBcrAg方法

HBV前核/核心基因被翻译成核心蛋白，前核/核心前体和HBeAg；这些蛋白均可以统一测定。HBcrAg可以组装成不含HBV RNA或HBV DNA的有缺陷的包膜颗粒。现已已经开发出了测定所有这些形式的前核/核心基因表达的核心相关抗原免疫测定方法。已经显示血清HBcrAg水平与肝HBV DNA相关，并用于预测中止NA治疗后的病毒复发。

血清HBcrAg水平的检测可能为转录活性cccDNA提供间接证据。

测定HBV免疫应答的方法

对HBV免疫应答的恢复是HBV“治愈”的关键一步。很多免疫调节疗法已经专注于恢复T细胞应答。

然而对抗病毒治疗的应答标志物也可以用于评估免疫调节治疗应答，用于测量特异性免疫应答改善以预测病毒清除的标准化测定方法将在早期药物开发中提供信息。

需要对用于评估对HBV免疫应答恢复的标准化测定方法达成共识；这种测定方法的方法学，敏感性和特异性；它们在不同实验室的正确解释和重复性；以及测定方法的交叉验证。

已经批准的HBV诊断方法

在新型抗病毒药物和免疫调节疗法开发的同时开发替代HBV治愈终点的标准检测方法是需要加快研究的。在闭门会议环节，美国FDA和EMA代表提出考虑在所有phase 2 和 3期试验阶段中同时测试多个中间次要终点。研究的测定方法必须标准化，共享数据和测定平台，以便于鉴定适当的替代标记物的有效性。

重要的是，新治疗手段的批准与用于测定功效或预测应答的新诊断测定方法的开发和批准相关。