CLIN CHEM：多重液滴数字PCR方法适用于新生儿筛查，载体状态和脊髓性肌萎缩的评估
2018-10-30 MedSci MedSci原创
脊髓性肌萎缩症（SMA）是一种进行性神经肌肉疾病，伴有神经元变性，会导致肌肉萎缩和呼吸衰竭。SMA通常由包括存活运动神经元基因SMN1的外显子7的纯合缺失引起，并且其临床过程受附近5q SMN1旁系同源物SMN2的拷贝数影响。多重连接探针扩增（MLPA）和实时定量PCR（qPCR）可以检测SMN1缺失。然而，qPCR需要标准化或标准曲线，并且MLPA要求DNA浓度高于可从干血斑（DBS）获得的浓度
脊髓性肌萎缩症（SMA）是一种进行性神经肌肉疾病，伴有神经元变性，会导致肌肉萎缩和呼吸衰竭。SMA通常由包括存活运动神经元基因SMN1的外显子7的纯合缺失引起，并且其临床过程受附近5q SMN1旁系同源物SMN2的拷贝数影响。多重连接探针扩增（MLPA）和实时定量PCR（qPCR）可以检测SMN1缺失。然而，qPCR需要标准化或标准曲线，并且MLPA要求DNA浓度高于可从干血斑（DBS）获得的浓度。在此，研究人员开发了一种多重液滴数字PCR（ddPCR）方法，用于同时检测SMN1DBS和其他组织中的缺失和SMN2拷贝数变异。还开发了用于DBS 的SMN1 Sanger测序过程。
研究人员用Bio-Rad AutoDG和QX200 ddPCR系统同时测量SMN1，SMN2和RPP30浓度。共测试了1530个DBS和12个SMA患者。
群体研究证实在未受影响的标本中检测到1至5个SMN1外显子7拷贝，而SMA患者为0个SMN1拷贝。对于≥1个SMN1拷贝的个体，检测内和检测间不精确度<7.1％CV 。测试12个SMA阳性样品灵敏度和特异性为100％。
研究表明，该ddPCR方法灵敏，特异，适用于对SMA的新生儿筛查和携带者状态检测。它还可以与平行的ddPCR T细胞切除检测结合，用于严重的联合免疫缺陷治疗。
原始出处：
Noemi Vidal-Folch, Dimitar Gavrilov, Multiplex
Droplet Digital PCR Method Applicable to Newborn Screening, Carrier Status, and
Assessment of Spinal Muscular Atrophy.
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