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为什么微生物室间质评成绩不理想?鉴定思路很重要!

2018/6/11 作者:冯永旺   来源: 检验医学网 我要评论1
Tags: 微生物  室间质评  检验  
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作者:天津市太山肿瘤医院冯永旺

室间质量评价是多家实验室分析同一样本并由外部独立机构收集和反馈实验室上报的结果,以此评价实验室操作的过程。通过实验室间的比对判定实验室的校准、检测能力以及监控其持续改进能力。

其实质评核心是持续不断地提高实验室的检测能力。但是由于每个实验室的仪器设备以及人员配备不一样,所以导致结果参差不齐。但是根本原因是由于检验人员没有好的鉴定思路。接下来就以卫生部室间质评测定为例子讲一下自己实验室微生物室间质评测定的原则与思路,希望能够对读者有一丝帮助。

1、室间质评开展

每年卫生部临床检验中心会下发《临床检验室间质量评价计划》,往往工作人员认为计划书与自己无关,其实在室间质量评价计划书中会明确告诉明年的检测范围以及分离鉴定的菌株范围,实验室可以根据检测范围调整自己实验室的检验项目。

2、室间质评接收

许多检验人员不太关注室间质评的运输,尽管卫生部临床检验中心委托EMS为大家快递室间质评物,能够很好地保证质量,但是作为检验人员要对检验前质量非常关注,所以每次一定要很仔细地检查质控物质量。

3、室间质评说明书阅读

对于一些年资高的检验人员已经习惯了每年按部就班地操作室间质评,往往忽略仔细阅读说明书,其实在室间质评说明书几乎每年都会有一些变化并且使用黑体字明确标出。往往我们没有把实验做好就是由于没有仔细阅读说明书。

4、室间质评检测

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选择不同种类的琼脂平板,如表1所示:

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冻干粉的溶解:

在生物安全柜内无菌操作开启干燥菌种管,取0.3ml肉汤加入菌种管中,35℃培养箱10min后取出,混匀。在实际工作中许多实验室在干粉溶解过程选用血培养瓶中培养液进行溶解,这种方法可能会对奈瑟菌属的检出有一定影响,因为培养液中的抗凝剂SPS对奈瑟菌属有毒性作用。所以最好选用肉汤进行溶解干粉。

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微生物培养:

用移液器吸取溶解好的质控样本,一般10μL即可,在接种前先把培养基恢复到室温,分别接种对应培养基,采用分区划线,许多实验室采用密涂的方法接种,这样不利于复合菌的分离,而且会影响菌落的典型形态。血平板和巧克力培养基置于5%-10%CO2环境下培养16-18小时。其它培养基选择防止普通培养箱。

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①观察培养基生长情况

细菌鉴定过程中首先要观察每一份室间质评样本是否生长,如果没有生长要考虑是否时间不够,还是培养基选择不合适,或者是接种前细菌已经死亡。对各种情况一一排除。接下来要对有正常菌群部位的样本排除正常菌群,仔细辨识病原菌,分别进行涂片,革兰染色,特殊细菌选择做抗酸染色或弱抗酸染色。原始平板至少培养3天,每天观察生长情况。如果样本来源特殊要培养5-7天,例如快速生长分支杆菌和诺卡菌。

②生化试验

随着微生物自动化的发展,许多实验室都舍弃了生化试验完全依靠仪器,殊不知没有任何一个仪器是完美的,仪器永远不可能取代人的作用。所以基础生化试验一要定在实验室常规开展,对于革兰阳性球菌,首先根据血平板上菌落颜色、大小以及最重要的溶血特征做出初步判断,然后做触酶试验,区分葡萄球菌和链球菌,触酶阳性做血浆凝固酶试验,再选择合适的阳性卡进行鉴定;对于阴性杆菌,首先做氧化酶试验进行初步鉴定。然后根据鉴定程序选择合适鉴定卡进行鉴定,同时加做吲哚、双糖铁等试验。

③仪器鉴定

选择合适的卡片进行鉴定,一般几小时或十几小时可以鉴定出最终结果,鉴定结果一般都比较准确,对于一些特殊细菌要再次观察原始平板上的菌落特征和细菌涂片结果,判断仪器鉴定结果与平板上的菌落是否吻合。必要时选用第二种方法鉴定。

5、药敏试验

根据样本来源和分离的细菌种类,按照最新的CLSI标准选择合适的抗菌药物进行药物敏感试验,(选用CLSI标准至少是上一年标准)其中A类是必须选择,B类抗生素最好也都选择,C类是常用抗生素,其中尿液样本必须选择U组抗生素。

6、鉴定过程注意事项
  • 室间质评必须按照日常处理临床样本方式处理。

  • 必须按照要求坚持做好室内质控。

  • 注意混合感染样本,以防止漏检。

  • 能够准确判断定值菌以及正常菌群。例如伤口分泌物样本经会出现表皮葡萄球菌。一定要认识到表皮葡萄球菌是皮肤的定植菌。

  • 形态相识菌株之间的鉴别,不仅要依靠仪器,要选择敏感性强的试验进行鉴别。

  • 特殊细菌的检出,通常室间质评样本中会出现实验室分离率不高的菌株,通常检出特殊细菌以后要重新翻阅参考书籍,确定该菌株的正确性,同时要做示教图片,实验室共同学习以便全体人员掌握该菌株的检测方法。

  • 质控样本细菌不生长的原因:
①培养时间过短,由于质控样本是模拟样本不同于临床样本。需要延长培养时间。例如人心杆菌生长缓慢,应每天观察生长情况。

②培养基选择不正确,例如一些嗜盐菌在普通培养基很难生长,需要高盐培养基。

③样本接种量太少。

④样本中病原菌已经死亡。该类情况发生通常是由于运输温度不合适或者存储温度过高。室间质评样本邮递至微生物实验室一定要仔细阅读说明书上的存储温度。

7、结果报告

通常报告使用自己微生物实验室所使用的报告模式,报告有明显标识。汇总所有报告填写上报记录表,室间质评样本等同于临床样本,所以报告执行双人复核模式。以防误报发生。药敏报告要注意特使耐药表型。

8、分析报告

每次室间质评成绩下发以后,结合自己实际情况要认真写分析报告,尤其是自己实验室错误的部分,认真总结。其实正确结果同样要写分析报告,在报告中详细写出每株菌株鉴定的过程,方便溯源,为其他同事学习提供资料。同时每次分析改正,使实验室能够持续改进,不断提高检测能力。

总体来说,室间质评的核心内容是持续改进,不断提升微生物实验的检测能力。参加室间质评也不是就是为了一个好的成绩,更重要的是提升实验室每位工作人员的检测能力,提高鉴定水平。在微生物实验过程中每个环节都至关重要,任何一个环节都会影响到实验的准确性。因此只有做好每个环节才能够把室间质评做好。同时实验室人员要善于学习和总结。只有不断接收新的知识并且熟练地运用在日常工作中。才能真正做到为患者服务。



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三生有幸

学习一下谢谢

(来自:梅斯医学APP)

2018/6/12 6:46:03 回复

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