临床PCR实验室污染的预防与清除，这些你都知道吗？
2018-12-06 王海滨 检验医学网
其实，临床PCR实验室污染无时不在，只是大多实验室没有把污染的监控纳入日常工作程序，因此即使有散在污染的发生，也较少采取措施或引起重视，只有发生严重污染无法报告时，才重视清除污染。分子生物学实验室应该本着“预防第一、清除第二”的观点，这样才能使工作“长治久安”。由于实验室污染涉及环节较多，现分几个专题进行讨论。
其实，临床PCR实验室污染无时不在，只是大多实验室没有把污染的监控纳入日常工作程序，因此即使有散在污染的发生，也较少采取措施或引起重视，只有发生严重污染无法报告时，才重视清除污染。分子生物学实验室应该本着“预防第一、清除第二”的观点，这样才能使工作“长治久安”。由于实验室污染涉及环节较多，现分几个专题进行讨论。
——实验室污染的发现与来源识别
PCR实验室污染发生后如何被发现的？污染发生后如何进行污染物来源的识别？有哪些必要的措施？针对以上问题分析如下：
1
病人或医生对检测结果产生质疑，患者认为是阴性的样本，而结果为阳性；医生持续对检测结果表示质疑，感觉阳性率太高。此时，应该做污染识别实验，如设立试剂空白对照、多个阴性对照和弱阳性对照等进行识别。
1、操作人员重新检查实验步骤，确定污染是否仅仅局限在阴性质控品，如果不能确定，至少应该将怀疑为污染的临床样本重新检测。
2、前后结果对比：对比过去随机检测的临床样本结果，如果有阴性样本逐渐减少趋势，应高度怀疑是否发生了实验室污染，应设立多个阴性质控品（3-5个）进行验证。
2
试剂盒的阴性质控品呈阳性扩增，但检测样本中尚有明确的阴性样本
3
检测样本全部为阳性，全部临床检测样本没有阴性结果，包括阴性质控品。
1、重新检查实验操作过程，确定是否存在系统污染的存在，如核酸裂解液、漂洗液、离心管等是否存在携带污染，试剂中的组分如酶和反应液是否被高次方样本或标准品沾染。此时应立即设立试剂空白对照进行验证。
2、系统污染的确认：设立3-5个纯阴性样本（建议采用献血员血浆或小牛血清）和3-5个弱阳性样本同步检测，如果阴性样本部分或全部阳性，且与弱阳性样本的定量值相近，即可确认为实验室存在系统污染。
4
污染的原因查找：
1、基因组核酸污染：发生在核酸制备过程或之后。鉴别方法：采用另一区域设计的引物和探针试剂盒检测同一样本，如果污染持续存在，说明污染来自于基因组核酸，应从核酸制备环节进行污染的清除。
2、扩增产物污染：来自扩增产物的外泄或试剂盒使用的标准品，用不同区域的引物探针试剂盒进行检测，污染消失，证明污染来自扩增产物。
3、仪器自动化核酸制备的污染问题：与生化和血细胞分析项目不同，PCR存在指数扩增的放大过程，因此对不同样本核酸的绝对隔离要求极高，目前所有全自动核酸提取仪器均难以避免污染的发生！仪器自动化核酸制备的污染主要来自提取核酸，清除方法比手工法实验室污染更为麻烦，需要设备厂家参与。
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