Science Translational Medicine：CRISPR基因编辑的通用型CAR-T，治疗儿童白血病临床试验结果发布

2017年10月，FDA 批准了首款 CAR-T 细胞疗法上市，人类进入细胞治疗时代，CAR-T 细胞疗法在血液类癌症中取得了很好的临床效果。由于 CAR-T 细胞改造自患者的自体 T 细胞，因此能够在患者体内长时间发挥作用，且不产生排异反应。

如今，CAR-T 细胞疗法已经成为儿童B细胞急性淋巴细胞白血病（B-ALL）的标准疗法。然而，对患者的自体 T 细胞进行基因工程改造，这种个性化操作耗时长，一些急性白血病患者没有足够时间等待。此外，许多严重患者已经没有足够的 T 细胞用于工程化改造。

因此，由健康捐赠者来源的 T 细胞构建的 CAR-T 可以避免上述问题，并可能开发出“现货型” CAR-T 产品。但这需要对 CAR-T 细胞进行额外的基因修饰，以防止移植物抗宿主病（GvHD）以及身体对 CAR-T 细胞的排斥。

目前已经有不少研究及一些临床试验使用 CRISPR-Cas9 基因编技术来构建同种异体的“现货型” CAR-T 细胞，敲除 T 细胞的 TRAC 基因（表达T细胞受体α链），可避免移植物抗宿主反应（GvHD），这是移植后最主要的并发症，也是引起移植后死亡的主要原因。敲除 T 细胞的 CD52，可在阿仑单抗存在的情况下提高通用型 CAR-T 细胞的持久性。

2022年10月26日，英国大奥蒙德街儿童医院的研究人员在 Science 子刊 Science Translational Medicine 发表了题为：Phase 1 clinical trial of CRISPR-engineered CAR19 universal T cells for treatment of children with refractory B cell leukemia 的1期临床试验论文。

研究团队使用下一代 CRISPR-Cas9 基因编辑技术，敲除了 CAR19 T细胞的 TRAC 和 CD52，构建了通用型 CAR-T 细胞——TT52CAR19 T细胞，并进行了治疗儿童B细胞急性淋巴细胞白血病（B-ALL）的1期临床试验。

这6名患儿在接受基于 CRISPR 基因编辑的 CAR-T 细胞疗法后，有4人在28天内病情缓解，这使他们能够接受骨髓干细胞移植，已重建健康的免疫系统。在这4人中，2人分别在治疗后9个月和18个月后处于持续缓解期，但遗憾的是，另外2人在干细胞移植后复发。

在这项研究中，总体副作用在预期范围内，符合主要安全目标，这为基于 CRISPR 基因编辑的 CAR-T 细胞疗法的治疗潜力提供了证据。

这项研究结合了基于慢病毒载体的 CAR-T 技术和前沿的 mRNA 技术，使用慢病毒载体给 T 细胞加 CAR 并递送 CRISPR 系统的 gRNA，使用 mRNA 技术向细胞递送和表达 Cas9 蛋白。

该研究用慢病毒载体递送 CAR19、CD52 sgRNA 和 TRAC sgRNA，使用电转染递送 Cas9 mRNA，构建了 TT52CAR19 T 细胞。

患者在通过氟达拉滨、环磷酰胺和阿仑单抗进行淋巴细胞清除后，单次输注0.8×10E6个细胞-2.0×10E6个细胞/千克体重，未立即出现毒性反应。

6位患者输注 TT52CAR19 T 细胞后，4位出现细胞扩增，缓解后继续输注。其中2位患者出现2级细胞因子释放综合征，1位患者出现短暂的4级神经毒性，1位患者出现皮肤移植物抗宿主病（GvHD），并在之后缓解。其他并发症在预期范围内，符合主要安全目标。

这研究证明了基于CRISPR基因编辑的 CAR-T 细胞疗法是安全可行的，具有治疗潜力。

该临床试验的主要领导者、细胞和基因治疗专家 Waseem Qasim 教授表示，这项研究治疗的这种无反应白血病非常罕见，但很高兴能为这些最难治的儿童白血病提供新的疗法，特别是在其他选择都用尽了的情况下。虽然目前还有挑战需要克服，但这项研究是一个很有希望的展示，展示了如何利用新兴的基因组编辑技术来解决一些病情最严重且未得到满足的健康需求。

该临床试验的参与者、白血病专家 Ajay Vora 教授表示，这些接受治疗的儿童已经面临着可能出现的最糟糕的预后。只有通过临床试验才有可能拯救更多的年轻生命，永远感谢所有参与这项研究的家庭，他们的参与将在未来帮助更多的孩子。

该临床试验的参与者、骨髓移植专家 Kanchan Rao 博士表示，这项研究增加了越来越多的证据，表明基因组编辑的 T 细胞可以成为目前可用的治疗方法的可行替代品。虽然这并不是在所有情况下都会成功，但对参与这项研究中的一些孩子来说，是一种救命的方法。

原始出处：

GIORGIO OTTAVIANO， et al. Phase 1 clinical trial of CRISPR-engineered CAR19 universal T cells for treatment of children with refractory B cell leukemia. SCIENCE TRANSLATIONAL MEDICINE， 26 Oct 2022， Vol 14， Issue 668.