SNX17能增加LRP4膜表达、促进乙酰胆碱受体聚集，可改善 EAMG

关键词：重症肌无力；LRP4；治疗靶点

重症肌无力（MG）最显著的病理特征是自身免疫损伤所致的神经肌肉接头（NMJ）突触后膜（终板膜）乙酰胆碱受体（AChR）聚集障碍。

而作为低密度脂蛋白受体（LDLR）家族中一员的低密度脂蛋白受体相关蛋白4（LRP4），因Agrin-LRP4-MuSK信号级联，在终板膜AChR聚集过程中发挥了重要作用。

分拣微管连接蛋白17（SNX17）是一种能够调控多种内化膜蛋白降解和再循环过程的胞内衔接蛋白，其特有的PX和FERM 结构域能够通过特异性识别LDLR家族成员胞质结构域中的“-NPxY-”基序，促进内化膜蛋白循环回膜，进而再次发挥受体功能。但这一机制是否对在MG中也存在类似作用尚不清楚。

2022年10月，郑州大学河南医药科学研究所神经免疫学系高峰团队在Front Immunol发表了题为“Sorting nexin 17 increases low-density lipoprotein receptor-related protein 4 membrane expression: A novel mechanism of acetylcholine receptor aggregation in myasthenia gravis”的研究，以EAMG小鼠模型为研究对象，探索SNX17与LRP4的作用关系，并研究AChR的聚集状态变化和肌无力改善情况。

这篇论文也是10月份发表的重症肌无力及相关论文中最受关注论文之一（见【22年11月】上月重症肌无力研究重要论文汇总），研究设计严谨，结论客观而可靠，具有很高的科学意义。

由此，我们邀请了论文的第一作者贺笑笑做了编译和解读，通讯作者高峰教授做了审核。

研究设计

1、选用C2C12肌管细胞，通过施加LRP4抗体刺激诱导细胞表面LRP4蛋白内化，利用免疫共沉淀技术探究SNX17与LRP4的胞内相互作用关系。通过敲低和过表达胞内SNX17，从细胞层面探讨SNX17对LRP4的膜表达、MuSK磷酸化以及AChR聚集的作用。

2、建立EAMG小鼠模型，通过敲低和过表达小鼠腓肠肌中的SNX17，从动物层面上探讨SNX17对于Agrin-LRP4-MuSK信号级联通路的调控作用，从而总体评估SNX17对EAMG小鼠模型的作用效果。

图1. 动物实验过程

主要研究结果

1、SNX17过表达增加了细胞表面LRP4的表达、MuSK磷酸化和AChR的聚集

通过施加LRP4抗体刺激诱导细胞表面LRP4蛋白内化，利用免疫共沉淀技术证明了SNX17与LRP4之间的相互作用关系（图2A）。而当过表达肌管细胞中的SNX17，细胞表面LRP4的表达（图2B）、MuSK的磷酸化（图2C）以及细胞表面AChR聚集的数量（图2D）均显著增加。证明了SNX17通过增加内化LRP4的循环回膜量，从而促进MuSK磷酸化和AChR聚集的作用。

图2. SNX17 敲除降低了细胞表面 LRP4 表达、MuSK 磷酸化和 AChR 聚集。

2、EAMG小鼠腓肠肌中SNX17表达降低，NMJ处AChR呈碎片化

研究利用AChR-α亚基（Rα 97～116）肽段作为免疫原通过主动免疫建立了EAMG模型，通过Western blot检测发现EAMG模型小鼠腓肠肌中SNX17的表达降低（图3A）。并且，LRP4表达和MuSK磷酸化水平也低于正常小鼠（图3B）。此外，正常组和溶剂对照组NMJ处的AChR形态正常，呈完整的椒盐卷饼状结构，但EAMG小鼠肌丝上AChR的面积显著降低，呈明显的碎片化（图3C），提示SNX17可能影响NMJ处的AChR。

图3. EAMG小鼠腓肠肌中SNX17表达降低，NMJ处AChR呈碎片化

3、SNX17过表达增加EAMG小鼠腓肠肌中LRP4的表达和MuSK磷酸化，改善NMJ处AChR形态和腿部无力

当EAMG小鼠腓肠肌中的SNX17过表达后，增加了LRP4的表达和MuSK磷酸化水平（图3A）以及NMJ处AChR的面积，改善了AChR的碎片化形态（图3B）。此外，在SNX17过表达小鼠的腓肠肌纤维中，未观察到明显的损伤现象，如炎性细胞浸润和肌纤维萎缩等（图3C）。与模型对照组肌电图第五振幅27.12%±1.63%的衰减率相比，SNX17过表达组第五振幅衰减率降低至13.07%±0.89%（图3D），腿部力量尽管和正常小鼠仍有差距，但也得到了一定的恢复（图3E）。

图3. SNX17过表达增加EAMG小鼠腓肠肌中LRP4的表达和MuSK磷酸化，改善NMJ处AChR形态和腿部无力

结  论

这项研究阐明了SNX17通过与内化的LRP4相互作用来增加细胞表面LRP4的表达进而促进MuSK磷酸化和AChR聚集，最终改善EAMG小鼠肌无力的作用机制。

其过程可能为：SNX17识别并绑定因内化而进入早期内体的LRP4，介导LRP4向循环内体转化进而返回肌细胞膜。而回膜的LRP4通过Agrin-LRP4-MuSK信号通路诱导AChR聚集，从而接受突触前膜释放的ACh，进一步恢复神经肌肉兴奋传递（图4）。

这一新机制不仅是SNX17参与受体再循环概念内涵的有益支持和补充，而且揭示了SNX17可能是未来MG治疗的一个新靶点。

图4. SNX17 增加细胞表面 LRP4 表达以促进 AChR 聚集和神经肌肉兴奋性传递恢复的潜在机制。