Front Immunol ：粒细胞集落刺激因子通过促进单核细胞的M2样转变加速乙型肝炎病毒相关的急性慢性肝衰竭的恢复

背景:慢加急性肝衰竭(ACLF)是一种临床综合征，其特征是由潜在慢性肝病的急性损伤引起的严重肝功能障碍和相当高的短期死亡率。ACLF的标志是肝组织大面积坏死和严重炎症。然而，目前对ACLF的治疗侧重于针对触发损伤和优化并发症的临床管理。旨在促进肝再生和抑制炎症的有效治疗策略仍然有限。目前，肝移植是预防ACLF的唯一有效疗法；然而，它的应用可能无法推广，因为它的成本过高和捐助者不足。因此，对于新的治疗方法存在未满足的需求。虽然传统上认为粒细胞集落刺激因子(G-CSF)是一种造血调节剂，但最近被认为是ACLF的候选治疗药物。几项研究已经证实了G-CSF在ACLF治疗中的有效性和安全性。然而，最近的一项研究显示，G-CSF对ACLF患者没有显著的生存益处。因此，需要进行更好的调查。G-CSF在肝组织再生和免疫反应调节中的作用已被证明。在动物和人类中的研究表明，G-CSF可以在肝衰竭期间促进造血干细胞的迁移以及肝祖细胞的增殖和分化。其他研究已经证明了G-CSF对ACLF的树突细胞和嗜中性粒细胞的有益作用。然而，作为参与肝衰竭发展和进程的核心免疫细胞，G-CSF对ACLF患者单核细胞/巨噬细胞的影响仍未被研究。单核细胞/巨噬细胞的特点是高度多样性和可塑性。单核细胞通常分为三个亚群:CD14++CD16(经典型)、CD14++CD16+(中间型)和CD14+CD16++(非经典型)。基于它们的分化状态，单核细胞也可以分为M1(促炎)和M2(抗炎/促恢复)亚型。M1单核细胞在其表面高度表达HLA-DR和CD86，并分泌促炎性TNF-a和IL-6作为主要细胞因子，而M2单核细胞过表达CD163和MerTK，并主要分泌抗炎因子如IL-10 。因此，单核细胞的可塑性可能成为ACLF免疫调节的潜在治疗靶点。然而，G-CSF对ACLF患者单核细胞的作用需要进一步研究。

目的:本研究旨在验证G-CSF的临床疗效，并探讨其对乙型肝炎病毒(HBV)相关的ACLF (HBV-ACLF)患者单核细胞的影响。

方法:我们对使用G-CSF治疗HBV-ACLF病进行了一项大型随机对照临床试验。共有111名HBV-ACLF病患者被前瞻性随机分为G-CSF组(每天5 mg/kg G-CSF，持续6天，然后每隔一天一次，直到第18天)或对照组(标准治疗)。所有参与者都接受了至少180天的随访。分析单核细胞计数和死亡风险之间的关系。使用流式细胞术在体内和体外实验中评估G-CSF对来自HBV-ACLF患者的单核细胞的表型和功能的影响。

结果:G-CSF组的180天存活率高于对照组(72.2%对53.8%，P = 0.0142)。在G-CSF治疗组中，第0天和第7天的单核细胞计数与完全调整模型(模型3)中评估的死亡风险独立相关[第0天:危险比(HR) 95%可信区间(CI): 15.48 (3.60，66.66)，P = 0.0002在第7天:HR (95% CI): 1.10 (0.50，2.43)，P=0.8080]。进一步的分析表明，在HBV-ACLF患者中用G-CSF治疗后，单核细胞中M1样标记物(HLA-DR和CD86)的表达降低(HLA-DR:P = 0.0148；CD86: P = 0.0764)。MerTK (M2样标记)的表达增加(P = 0.0002)。在没有脂多糖(LPS)刺激的情况下，单核细胞分泌的TNF-α、IL-6和IL-10减少(TNF-α:P < 0.0001；IL-6:P = 0.0025；IL-10: P = 0.0004)或用LPS刺激(TNF-a:P = 0.0439；P = 0.0611IL-10: P = 0.0099)。在体外实验中也观察到了类似的效果。

图1 Kaplan–Meier曲线显示与对照组相比，G-CSF组的180天存活率。粒细胞集落刺激因子。

表1患者单核细胞计数和180天死亡率之间的关系。

图2 HBV-ACLF患者单核细胞的门控和G-CSF对单核细胞亚型的影响。(A)用于确定单核细胞及其亚群的流式细胞术分析和门控策略。(B)G-CSF对HBV-ACLF病患者单核细胞亚型的作用(n=12)。使用非参数(Wilcoxon配对检验)统计分析。数据以四分位范围的中位数表示。ns代表P > 0.05粒细胞集落刺激因子；乙型肝炎病毒相关的慢加急性肝衰竭。

图3HBV-ACLF病患者(n=12)在G-CSF治疗前(第0天)和治疗后的循环单核细胞表型。(A)G-CSF治疗前后HBV-ACLF单核细胞上CD86、HLA-DR、MerTK和CD163的表达。(B)用G-CSF处理后单核细胞的表型变化。(C)用G-CSF处理后单核细胞上组织归巢受体的表达。使用非参数(Wilcoxon配对检验)统计分析。数据以四分位范围的中位数表示。与第0天相比，*P < 0.05，**P < 0.01，***P < 0.001。ns代表P >0.05。

结论:G-CSF治疗能提高HBV-ACLF病患者的生存率。G-CSF可以促进单核细胞的抗炎/促恢复表型(M2样)转变，这可能有助于ACLF的恢复。

原文出处：Tong J,  Wang H,  Xu X,et al.Granulocyte Colony-Stimulating Factor Accelerates the Recovery of Hepatitis B Virus-Related Acute-on-Chronic Liver Failure by Promoting M2-Like Transition of Monocytes.Front Immunol 2022;13