脑脊液蛋白检测结果为何假性偏低

2022-07-01 张宇星 宜宾市第二人民医院检验科 “检验医学”公众号

目前国内外脑脊液总蛋白测定常用邻苯三酚红钼络合显色法、免疫比浊法、沉淀比浊法和染料结合法。

前 言

脑脊液蛋白含量检测对中枢神经系统的感染、梗阻和出血等多种疾病的诊疗有着重要意义。目前国内外脑脊液总蛋白测定常用邻苯三酚红钼络合显色法、免疫比浊法、沉淀比浊法和染料结合法。我实验室使用的是邻苯三酚红钼法,近段时间发现部分脑脊液蛋白测定结果偏低,与临床不符合。现分享如下。

案例经过

案例一

经临床医生反应我们检测的脑脊液蛋白结果与临床表现不符合,我们回顾报告单:

脑脊液生化报告单显示LDH升高、GLU降低、Cl明显降低,脑脊液蛋白降低!接着看该患者脑脊液常规:

脑脊液常规报告显示脑脊液外观无色、清晰,潘氏试验1+,有核细胞1267×10^9/L,单个核细胞占34%、多核细胞66%。无论是脑脊液生化相应的检查或脑脊液常规检查均和脑脊液蛋白测值低不符合。

再查看患者病史,患者因发热、头晕头痛、恶心呕吐1周入院,院外行胸部CT考虑“急性血行播散型肺结核”可能,入院考虑:1.急性血行播散型肺结核?2.结核性脑膜炎?3.结核性腹膜炎?

入院后行了颅脑CT(平扫+增强):符合结核性脑膜炎表现。综上表明脑脊液蛋白应该是增高的,那为何检测出结果却偏低呢?

由于标本保存时间过长,已不能查看标本状态,我们查看了当天室内质控是在控的,近期完成的室间质评成绩也是满意的,当天其余脑脊液生化标本蛋白检测结果也无明显异常,暂时猜测是标本状态异常或者仪器检测过程吸样异常导致结果偏低。并特别注意此后脑脊液生化检测,不久又出现类似情况!

案例二

又发现一例脑脊液蛋白偏低的标本:

该脑脊液标本蛋白结果为0.023g/L,低于参考值。而脑脊液常规结果如下:

潘氏试验阳性,脑脊液蛋白测定却明显偏低!马上核对脑脊液标本,该脑脊液标本为肝素抗凝(绿头)管送检,标本状态无异常,室内质控无异常,并联系了试剂厂家的技术支持,用5个新鲜脑脊液标本与相邻三甲医院实验室用相同方法进行蛋白检测比对,结果差异不大,5个标本均可通过比对,证明我们实验室检测是没问题的。

我们再次探讨为什么脑脊液标本蛋白测定结果低呢?此时我们科扫地僧胡老师就提出是否为脑脊液生化标本用了肝素抗凝管的影响,随后我们再次做了相应试验:

第一次采用其他患者脑脊液标本(无任何添加剂的无菌玻璃管送检)分于肝素抗凝(绿头)管混匀,30分钟后测定脑脊液蛋白。

无菌玻璃管中脑脊液生化结果如下:

肝素抗凝(绿头)管中脑脊液生化测定结果为:

可见加入肝素管后的脑脊液除了蛋白检测结果明显降低外,其余项目结果影响不大。

第二次采用试剂配套的室内质控1、2水平分别加入两支肝素抗凝(绿头)管混匀,30分钟后同时测定室内质控1、2水平,和绿头管1、2,结果如下:

无论是脑脊液标本或者脑脊液蛋白的室内质控,加入肝素抗凝管后再进行检测蛋白水平都明显偏低。可见肝素抗凝管影响了脑脊液蛋白检测结果,且产生了明显负干扰!随后立即向临床反馈,脑脊液生化标本请用无任何添加剂的无菌容器送检。

案例分析

脑脊液标本采集后通常收集于3支无菌试管中立即送检,第1管用于细菌学检查;第2管做化学或免疫学检查,第3管做一般性状和显微镜检查。试管中无需加防腐剂、抗凝剂,但有时临床会使用EDTA抗凝管送检做脑脊液常规(一般性状和显微镜检查)、肝素抗凝管送检做脑脊液生化检测。

在此案例中发现,无论是患者标本还是质控品,肝素对领苯三酚红钼络合显色法检测脑脊液蛋白均产生了不同程度的负干扰,有研究表明可能是因为蛋白质(主要是白蛋白)和肝素都是带负电的,肝素有可能与脑脊液样本中的蛋白质竞争RPM从而干扰脑脊液蛋白的结合反应,进而影响实验结果,且肝素浓度和脑脊液蛋白检测结果呈一定程度的反比关系[1]。

而在我们检验日常中收到的脑脊液生化标本量少,而肝素抗凝管送检的脑脊液生化标本量更少,肝素是否影响检测结果让我们未引起重视。且面对脑脊液采集量多的时候,肝素抗凝管送检对蛋白测定影响程度可能较小也让我们难以发现。

脑脊液蛋白和特异蛋白常见于鉴别血/脑屏障对血浆蛋白质的渗透性的增加或鞘内的免疫球蛋白分泌的增加,脑脊液蛋白测定对临床的诊治极为重要。且脑脊液标本也来之不易,如若肝素影响检测结果可能引起临床医生的误诊,甚至贻误患者病情。肝素对脑脊液测定不仅在邻苯三酚红钼络合显色法产生干扰,也有研究提出肝素会对比浊法检测微量蛋白产生正干扰,且随着肝素锂浓度升高,干扰效果越强[2]。

总之,脑脊液化学检测应尽量避免使用肝素管收集,以免影响脑脊液蛋白真实结果。

总 结

在检验工作中,往往会出现很多因素影响真实结果,遇到检测结果异常,与其它检测指标不相符合,特别与临床表现不相符合的时候我们要深究原因,只做好分析中和分析后的质量保证,忽略分析前质量问题可能会出具不真实的结果。

专家点评

宜宾市第二人民医院胡孝彬主任技师

脑脊液生化检查主要用于颅脑疾病诊断的常用检查项目,对中枢神经感染,出血等疾病的鉴别有重要意义。相比血液,脑脊液中蛋白含量较少,用于血清蛋白检测的双缩脲法不适合于脑脊液微量蛋白的测定,而邻苯三酚红钼法是测定微量蛋白质的常用方法,其原理是在酸性介质中,邻苯三酚红-钼酸盐与样品中蛋白质形成复合物而进行定量。本案例通过实验验证了肝素对邻苯三酚红钼法检测脑脊液蛋白存在较大影响,使用肝素绿头管送检脑脊液蛋白质结果明显偏低。肝素抗凝剂绿头管是常用的急诊生化样本容器,因此应加强与临床沟通,使用无添加剂的真空管或者其他无菌容器作为脑脊液生化检测标本容器。

参考文献

[1]Yang JY,Chien TI,Lu JY,Kao JT.HeparinInterference in the Cerebrospinal Fluid Protein Assay Measured with aPyrogallol Red-Molybdate Complex[J].CLINICACHIMICA ACTA,2009,408(1-2):75-78.

[2]赵全能1,杨珍珍1,万正宇2,李多孚1.肝素锂对比浊法检测微量总蛋白的干扰分析[J].国际检验医学杂志,2016,37(3):364-366.

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