是谁干扰血尿HCG不合乌龙事件？

案例经过

4月4日将近12点下班时间，检验科标本接收窗口，一女子有气无力说到：医生帮忙加急检测我的血液和尿液结果，我担心我孩子保不住，说完这话，眼泪都出来了。旁边女子丈夫安慰到：老婆，对不起，我的错，不要紧张，我马上办理入院。我接收过标本一看，血液和尿液都是做HCG检测，然后跟女子说到，加急项目，最快1个小时，您在旁边稍坐休息。

该女子血液凝固离心处理后，上机检测血清人绒毛膜促性腺激素（电化学发光法）检测前，我们习惯性对血清用胶体金法进行一次检测，从而判定血清人绒毛膜促性腺激素是否需要稀释模式检测，早孕条是阳性的，于是用原倍模式上机。

血液结果：β-HCG：0.2 IU/L；同时体液室同事告知尿液HCG结果也是阴性。

我连忙叫女子丈夫咨询：昨晚夫妻同房后，女子下腹疼痛难忍，伴恶心、呕吐2次，在家自行检测验孕棒两条杠，怀孕了，担心同房导致孩子保不住，男子此时一直自责表示不知道妻子怀孕。安慰完患者后，我查阅该女子的彩超结果。

查彩超提示：内膜厚约1.1cm，内未见明显异常回声，子宫后方可见一低回声包块，大小约6.7cm×4.4cm，边界欠清，内回声不均匀。肝肾隐窝见最深约3.9cm液性暗区，考虑不排除黄体破裂可能？

不是怀孕？血液结果也是提示未怀孕，夫妻两人误解了？乌龙事件？

什么原因造成血HCG胶体金阳性，尿HCG阴性，化学发光法血HCG阴性性这种矛盾的结果呢？且同一血液标本方法学不同其检测结果也完全不同呢？发光仪器的质控、试剂全部都是在控，排除仪器故障问题。

案例分析

血清绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin，HCG)是妊娠时滋养层细胞合成并分泌的一种唾液酸糖蛋白，它是一种胎盘激素，是α亚基和β亚基组成，α亚基与黄体生成素（LH）、促卵泡成熟激素（FSH）、促甲状腺成熟激素（TSH）的α链亚基相类似，能与这些激素产生交叉免疫反应，而β链亚基与这些激素则有较大差异，交叉免疫反应很小，β亚基决定其生物学和免疫化学特性，是免疫性检测HCG的靶位[1]。HCG的产生直接与滋养体细胞数量生长有关，，HCG在受精卵着床后，由滋养层细胞分泌进入孕妇血液循环，血清HCG快速增值一直到孕期的8-10周达到高峰。

HCG对维持早期妊娠和胚胎发育有重要作用，是早期妊娠诊断和孕期监控的常用指标，其水平的骤降或大幅波动可能预示着异常妊娠或流产。此外，HCG在妊娠滋养层疾病（绒毛膜上皮癌等）的诊断和监控、妊娠高血压综合征的预测、唐氏综合征的产前筛查等疾病的筛查中的应用也极为广泛。

尿液HCG检测中，用晨尿可以提高检验的阳性率，其测试原理：尿液通过毛细管作用经过胶体金标记抗体时，会形成胶体金复合物。复合物向上运动，当尿液有HCG时，通过包被的抗-HCGα亚基Mcab（检测区）时，形成双抗体夹心胶体金复合物，在检测区呈现色带；复合物继续向上运动，和羊抗鼠对照线区形成胶体金免疫复合物，使得对照区呈现色带。不论尿液是否有HCG，对照区都会显示色带。尿液足够的情况下可反映该试纸的质量和样本选取的合理性，若对照区显示无色，则需要更换试纸，重新选取正常标准的样本检测[2]。

全自动化学发光免疫法检测HCG原理：根据微粒子酶促化学发光，将抗体结合在特定纳米材料上，采用双抗体夹心法，以金刚烷AMPPD为标记底物，在碱性磷酸酶（ALP）的催化下，AMPPD分解成AMP-D，释放出的化学能转化为光信号而发光，发光信号的强度与ALP成正比，检测信号的强度即可达到定量分析的目的。

当然，化学发光法也有局限性，检测过程中出现假阴性：

01

HCG分子的多样性

HCG分子在人的血液中有多种存在形式，除同时含有一分子α亚基和一分子β亚基的完整的HCG分子(称为全分子HCG又称为整分子HCG、规则HCG)外，还包括糖基化HCG、β-亚基C末端肽缺失HCG、游离-β亚单位、游离-α亚单位和缺刻HCG等。交叉反应物质存在：LH（促黄体生成素），FSH（促卵泡生成素），TSH（促甲状腺素），这三种激素与HCG的化学结构相似，均是糖蛋白复合物，均由α和β两个肽链亚基所组成，在化学、生物学、免疫学等方面具有相同特性，故相互间能发生交叉反应。

HCG主要由胎盘滋养细胞产生，成熟的滋养细胞主要产生完整的HCG分子，而游离HCG( F-βHCG) 及高糖化HCG在妊娠滋养细胞疾病( GTN)中明显高于正常妊娠，例如脑垂体疾病、甲亢、卵巢囊肿、子宫内膜增生、子宫癌等容易导致检测HCG的试验出现阳性反应，尤其异常妊娠时由滋养层中巨噬细胞分泌裂解HCG的酶异常升高，使降解产物分泌入血液中增加所致有关。

02

钩状效应的影响

钩状效应即HOOK效应，是指由于抗原抗体比例不合适而导致假阴性的现象。HOOK效应的影响化学发光免疫分析技术是以发光物作为标记物，通过抗原抗体的免疫结合过程，测定发光量对检测物进行分析。当检测物的浓度大大超出试剂中标记物浓度时，同样会受HOOK效应影响，使得测定结果偏低，甚至出现假阴性[3]。要消除此干扰，只有对血液样本进行适当稀释后重新测定。

03

不同检测试剂盒识别能力差异影响

已知在HCG分子上有16个抗原决定簇，5个在α亚单位上，7个在β亚单位上，4个抗原决定簇是结合依赖性的，只有α、β亚单位结合时才能测定，其中的2个在缺刻HCG时不能被检出。另外还有4个抗原决定簇只有在游离β亚单位上才能检出。因此，不同厂家使用的抗体不同，针对的抗原位点也存在着差异，因此使用不同厂家的试剂也可能造成检测结果的不一致。部分试剂盒检测血清中所有的HCG分子；有的则是检测血清中的全分子HCG；有的可特异性地检测某一个相关分子，如游离β亚单位的检测等。若所使用的试剂不能检测糖化HCG、缺刻HCG或游离-亚单位等这些相关分子，就可能使测定结果呈现假阴性。

回归该患者的检测结果，难道是异嗜性抗体的影响？

嗜异性抗体(Id)是由低纯度抗原引起的，又称之为对非特异性抗原产生的抗体应答，它是由已知的或未知的抗原物质刺激人体产生的一类具有足够滴度、能与多个物种的免疫球蛋白发生相对弱的结合的多重特异性的免疫球蛋白，它能和原抗原毫无关系的抗原起反应，并可以与许多动物免疫球蛋白的片段结合，干扰实验，会导致我们使用双抗体夹心法检测的项目结果出现‘假阳性’结果[3]。

我科对鉴别异嗜性抗体干扰方法一般是“三部曲”验证。

首先我们给患者加做FSH、LH和TSH，结果正常，排除交叉反应影响。

FSH、LH和TSH激素检测结果

然后，我们用了“按倍数稀释样本后复测”，分别是1：2、1：4、1：8、1：16和1：32的检测，看检测结果是否是线性关系，该化学发光免疫法HCG阴性，我们直接用早孕试纸条看颜色的深浅间接的判断，发现1：8过渡到1：32颜色深浅跟倍数不一致。

血清稀释后结果

其次，考虑到部分异嗜性抗体会对D-D二聚体造成影响，假如标本中异嗜性抗体含量不高时，稀释法可以减少其干扰.对患者加做了D-D稀释检测检查，结果如下图：

原倍D-D结果

稀释1：2倍数的D-D结果

针对这一系列的思考后，致电临床医生进行临床沟通，针对性了解患者自身的一些情况，患者是否本身有自身免疫性疾病，或者近期是否免疫接种、输血或者接受单克隆抗体治疗，医生详细的告知患者情况，并表示该患者经过查体宫颈举摆痛明显，后宫隆饱满，腹肌紧张，考虑黄体破裂可能性大，盆腹腔积血，有急诊腹腔镜探查指征，且目前各项检查结果未提示手术禁忌症，拟今日送手术室行急诊腹腔镜探查术，备患侧卵巢囊肿剥除术，现患者已办理住院手续。

跟临床科室沟通完，可以非常有底气的发该患者的检验结果。

后续：该患者当日下午进行腹腔镜探查术+备患侧卵巢囊肿剥除术+双侧输卵管结扎术，复查血HCG和尿液HCG都是阴性。

案例总结

异嗜性抗体属人体内源性抗体，具有相对稳定的化学结构，分子量约160kD，由于其分子量较大，不易通过肾小球滤过膜，因此HA在正常情况下通常存在于血液中而不会存在尿液中，所以该患者血液HCG阳性，尿液HCG是阴性的，虽然对异嗜性抗体的研究有了很大的进步，但因其对于很多的不同的结合位点都有亲和力，到目前为止仍然无法彻底消除HA的干扰。

作为一名检验工作人，必须保证思维缜密，在日常工作中需要对所使用试剂的特性，特别是干扰因素进行必要的了解和验证，以确定试剂在哪些情况下可能会出现干扰。同时在出现检验结果与临床不符时，应及时对临床医学进行有效沟通交流和信息的共享，灵活运用各种技术和方法结合临床给出可靠检验结果。

【参考文献】

[1]Zhou H. Early prediction of the failure of methotrexate treatment by Days 1-4 serum β-hCG change and 48-hour pre-treatment increment inβ-hCG. J Obstet Gynaecol. 2023 Dec；43(1)：2183824. doi： 10.1080/01443615.2023.2183824. PMID： 36862104.

[2]Lertkhachonsuk R. Quantitative urine hCG and urine pregnancy test in gestational trophoblastic disease patients with low hCG titer. J Med Assoc Thai. 2015 Jan；98 Suppl 1：S36-41. PMID： 25764611.

[3]Use of heterophilic antibody blocking agent (HBT) in reducing false-positive hCG results