J Ethnopharmacol：通关藤提取物通过靶向AXL诱导非小细胞肺癌细胞内质网应激相关免疫原性细胞死亡

背景：通关藤味苦、微寒，归肺经，其标准化提取物(MTE)商品名为“消癌平注射液”，被广泛用于癌症治疗。既往对MTE诱导癌细胞死亡的药理作用进行了初步探讨。然而，MTE是否会引发肿瘤内质网应激(ERS)相关的免疫原性细胞死亡(ICD)尚不清楚。

目的：确定内质网应激在MTE抗癌作用中的潜在作用，揭示MTE诱导内质网应激相关免疫原性细胞死亡的可能机制。

方法：通过CCK-8和划痕试验检测MTE对非小细胞肺癌(NSCLC)的抗肿瘤作用。通过网络药理学分析和RNA测序证实MTE治疗后NSCLC的生物学变化。采用Western blot、qRT-PCR、活性氧(ROS)测定、线粒体膜电位(MMP)测定等方法探讨内质网应激的发生。采用酶联免疫吸附法和ATP释放法检测免疫原性细胞死亡相关标志物。

Salubrinal用于抑制内质网应激反应。用SiRNA和bemcentinib(R428)抑制AXL的功能。重组人Gas6蛋白(rhGas6)恢复AXL磷酸化。体内实验也证实了MTE对内质网应激和免疫原性细胞死亡反应的影响。通过分子对接和Western blot对MTE中AXL抑制化合物进行了探索。

结果：MTE抑制了PC-9和H1975细胞的活力和迁移能力。富集分析发现，MTE处理后的差异基因在内质网应激相关生物过程中显著富集。MTE降低线粒体膜电位(MMP)，增加ROS生成。同时，内质网应激相关蛋白(ATF6、GRP-78、ATF4、XBP1s、CHOP)和免疫原性细胞死亡相关标志物(ATP、HMGB1)上调，AXL磷酸化水平受到抑制。

然而，当salubrinal(一种内质网应激抑制剂)和MTE共处理细胞时，MTE对PC-9和H1975细胞的抑制作用受损。重要的是，抑制AXL的表达或活性也会促进内质网应激和免疫原性细胞死亡相关标志物的表达。在机制上，MTE通过抑制AXL活性诱导内质网应激和免疫原性细胞死亡，当AXL活性恢复后，这些作用减弱。

此外，MTE显著增加了LLC荷瘤小鼠肿瘤组织中内质网应激相关标志物的表达以及血浆中ATP和HMGB1水平。分子对接表明山奈酚与AXL的结合能最强，能抑制AXL的磷酸化。

结论：MTE可诱导非小细胞肺癌内质网应激相关免疫原性细胞死亡。MTE的抗肿瘤作用依赖于内质网应激。MTE通过抑制AXL活性触发内质网应激相关的免疫原性细胞死亡。山奈酚是抑制MTE中AXL活性的活性成分。该研究揭示了AXL在调节内质网应激中的作用，丰富了MTE的抗肿瘤机制。此外，山奈酚可能是一种新的AXL抑制剂。

文献来源：

Yuan Y, Guo Y, Guo ZW, et al. Marsdenia tenacissima extract induces endoplasmic reticulum stress-associated immunogenic cell death in non-small cell lung cancer cells through targeting AXL [published online ahead of print, 2023 May 17]. J Ethnopharmacol. 2023;116620. doi:10.1016/j.jep.2023.116620