古方“炸场”！南京中医药大学解锁《黄帝内经》隐藏技能：泽泻饮13种入血成分首曝光,修复阿尔茨海默血脑屏障，减少焦虑、增强记忆！

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阿尔茨海默病（AD）已不再只是“老年痴呆”的温柔代称，而是全球增速最快的神经退行“海啸”。β-淀粉样蛋白（Aβ）斑块与过度磷酸化的tau缠结被视为两大经典病理，但近十年临床反复折戟的“Aβ单抗”提醒我们：单靠清除沉积并不能逆转认知崩塌。越来越多证据把聚光灯投向更上游的“阀门”——血脑屏障（BBB）。当这道选择性筛网在疾病临床前期即出现缝隙，外周炎症因子、补体及金属离子长驱直入，既加速Aβ沉积，又触发tau播散，形成“渗漏-炎症-蛋白病变”的恶性循环。如何给BBB“打补丁”并同步扑灭神经炎症，成为AD干预的新支点。

传统中医虽无BBB概念，却擅长“治水先治源”，《黄帝内经》所载泽泻饮（ZXYF）由泽泻、白术、鹿衔草三味按2:2:1配伍，主“痰饮上扰、清窍失养”，其证候与AD早期“痰浊蒙窍”高度契合。南京中医药大学团队既往发现ZXYF可改善APP/PS1转基因小鼠突触可塑性，但究竟哪些成分能穿透入血、又如何作用于BBB与胶质细胞，一直缺乏系统解析。

最新发表于《Phytomedicine》的论文整合血清药物化学、网络药理学、多尺度BBB模型及基因干预，首次揭示ZXYF通过“扑灭A1型星形胶质细胞→阻断JAK2-STAT3信号→修复紧密连接”这一连锁反应，显著改善AD模型鼠的认知与屏障功能，为古方新用提供了可验证的分子蓝图。

图1 论文首图

ZXYF给药改善了AD小鼠的认知功能

研究采用8月龄APP/PS1双转基因雄鼠，随机给予低、中、高剂量ZXYF（1.9、3.8、5.7 g/kg/d）或阳性对照多奈哌齐（3 mg/kg/d），连续灌胃8周。开场实验（OFT）显示，模型鼠出现典型“贴壁”焦虑且自发运动量下降，高剂量ZXYF把中央区停留时间拉回至野生水平，提示情绪-觉醒系统率先受益。Y迷宫评估工作记忆，模型鼠交替正确率降至45%，中、高剂量ZXYF分别提升12%与18%，与多奈哌齐相当，说明即时信息更新能力显著修复。Morris水迷宫（MWM）空间学习阶段，模型鼠寻台潜伏期逐日延长，高剂量组第5天已缩短38%；探查实验中，高剂量组穿越原平台次数提高2.1倍，目标象限逗留时间增加32%，且游泳速度无差异，证实认知获益并非运动改善所致。免疫组化进一步显示，低、中剂量即可使海马Aβ1-42阳性面积下降30%以上，提示ZXYF在斑块沉积阶段即发挥“上游拦截”。综合行为-病理数据，ZXYF以剂量依赖方式恢复AD小鼠的识别、空间与情绪三维认知域，为后续屏障-炎症机制研究奠定功能基线。

图2 ZXYF给药改善了AD小鼠的认知功能

ZXYF给药改善了AD小鼠的血脑屏障功能 

透射电镜下，模型鼠脑微血管内皮变薄、紧密连接（TJ）电子密度断裂，基底膜分层，血管腔塌陷；高剂量ZXYF使TJ连续长度增加1.7倍，内皮厚度恢复至野生80%，管腔面积扩大60%，超微结构“补丁”肉眼可见。旁细胞渗透示踪实验显示，模型组脑/血荧光素钠比值升高2.4倍，提示血浆成分漏入脑实质；ZXYF显著降低外渗，屏障渗漏度回归野生水平。Western blot与免疫组化双轨验证，模型组海马ZO-1、occludin、claudin-5总蛋白下降40%–60%，且以CA1区最为脆弱；高剂量ZXYF将三种TJ蛋白上调1.8–2.3倍，CA1区ZO-1免疫阳性面积提升90%，claudin-5亦恢复至野生水平。值得注意的是，低剂量组Aβ斑块虽减少，但TJ蛋白未显著回升，提示“降Aβ”与“修屏障”可分步起效，而屏障修复需更高阈值。至此，研究在超微-分子-功能三个尺度锁定ZXYF的BBB保护效应，并暗示其可能通过旁分泌途径间接稳固TJ，而非直接作用于内皮细胞。

图3 ZXYF给药改善了AD小鼠的血脑屏障功能

ZXYF给药缓解了神经炎症并抑制了AD小鼠中A1型星形胶质细胞的反应性

GFAP免疫荧光显示，模型鼠海马星形胶质细胞胞体肥大、端足肿胀、分支减少，呈现典型“A1型”反应性；高剂量ZXYF使胞体面积缩小28%，端足回缩，总分支长度增加45%，覆盖度恢复至野生85%。ELISA阵列提示，模型组海马TNF-α、IL-6、IL-1β分别升高3.5、4.2与2.1倍，而抗炎IL-10下降50%；ZXYF显著下调三种促炎因子并提升IL-10，提示“促炎-抗炎”天平整体回摆。RT-qPCR检测A1特异性转录组（C3、Serping1、Srgn、Amigo2、Ligp1）发现，模型组上述基因上调4–10倍，A2标志（S100a10、Tgm1、Cd109）无显著变化；ZXYF将A1基因集下调40%–70%，而A2基因未受影响，证实其选择性抑制A1极化。Western blot进一步显示，模型组补体C3蛋白升高3.8倍，ZXYF将其压至野生1.2倍水平。综上，ZXYF通过“表型精准打击”阻断A1星形胶质细胞的神经炎症输出，为BBB保护提供了免疫微环境前提。

图4 ZXYF给药缓解了神经炎症并抑制了AD小鼠中A1型星形胶质细胞的反应性

血清中ZXYF化学成分的UPLC-Q-TOF-MS/MS分析

“入血才是硬道理”。研究给小鼠连续7日灌胃ZXYF后采集血清，采用UPLC-Q-Exactive高分辨质谱，在正、负离子双模式下共检测到92种移行成分；通过与空白血清及体外提取液比对，筛选出13种原型入血、峰面积高、跨膜能力强的“可吸收物质基础”。化学分类涵盖萜类（40.2%）、生物碱（21.4%）、酚酸及苯丙素（15.2%）等，其中泽泻来源的alisol C 23-acetate、白术来源的atractyloside A、鹿衔草来源的vaginatin及胆汁酸类成分stanolone、taurocholic acid均位列其中。SwissADME及admetSAR预测显示，除多糖片段外，其余12种化合物BBB透过系数（logBB）>0.3，具备直接作用于脑实质的理化基础。该清单为后续靶点捕捞与机制验证提供了“可追踪的化学护照”。

图5 血清中ZXYF化学成分的UPLC-Q-TOF-MS/MS分析

网络邻近分析提示ZXYF可能作用于AD的病理机制

将13种入血成分导入TCMSP、ETCM获取潜在靶点162个，与GeneCards等数据库整合的3380个AD相关基因交集，得到243个“ZXYF-AD”重叠靶点。STRING蛋白互作网络（242节点、3522边）经MCODE聚类后锁定10大核心靶标：JAK2、STAT3、MTOR、CCND1、ESR1、BCL2L1、JUN、SRC、PTGS2、EGFR，其中JAK2度值最高。GO与KEGG富集显示，这些靶标显著参与“炎症反应调节”“星形胶质细胞分化”“JAK-STAT信号通路”“钙信号通路”等，与A1极化-BBB损伤通路高度耦合。网络药理结果提示，ZXYF可能通过多靶-多通路“围猎”AD，而JAK2-STAT3处于信号中枢，值得优先验证。

图6 网络邻近分析提示ZXYF可能作用于AD的病理机制

ZXYF给药通过抑制A1型星形胶质细胞极化增强内皮屏障完整性

研究构建两种Transwell BBB模型：单培养bEnd.3内皮单层与共培养bEnd.3+C8-D1A星形胶质细胞。炎症鸡尾酒（LPS+TNF-α+IL-1α）使单模型TEER下降60%、FITC-葡聚糖渗透增加3倍，ZO-1/claudin-5蛋白下调，而ZXYF（2/6 mg/mL）干预未能逆转上述损伤，提示其不直接作用于内皮。相反，在共培养模型中，6 mg/mL ZXYF将TEER拉回基线，渗透系数降至模型组40%，TJ蛋白表达上调1.5–2倍，并显著减少星形胶质细胞C3分泌及IL-1β、IL-6、MMP-9等A1毒性因子。免疫荧光共定位显示，ZXYF使GFAP+/C3+双阳细胞比例下降58%，端足与血管共包绕恢复。由此，研究用“有无星形胶质细胞”的正反模型证明：ZXYF的BBB保护效应依赖其对A1极化的抑制，而非直接“糊墙”式修补内皮。

图7 ZXYF给药通过抑制A1型星形胶质细胞极化增强内皮屏障完整性

ZXYF主要活性成分靶向JAK2的分子对接、分子动力学模拟及分子互作验证

在13种入血成分中，10种与JAK2（PDB:3I07）对接亲和力优于–7 kcal/mol，其中stanolone、betulinic acid、alisol C 23-acetate位列前三，对接分数–8.8至–9.0 kcal/mol，远高于阳性对照ruxolitinib。100 ns分子动力学显示，stanolone-JAK2复合物RMSD在50 ns后稳定于2.67 Å，氢键数维持3–4个，Rg与SASA波动<5%，RMSF提示关键催化域保持刚性，预示结合稳定。CETSA细胞热迁移实验显示，60 μM stanolone使JAK2熔解曲线右移，热稳定性显著提升；SPR给出平衡解离常数KD=7.31×10–6 M，确证直接结合。结构分析表明，stanolone的A/B环与JAK2的Leu932、Val863、Ala880形成疏水口袋，3-酮基与Lys857主链羰基形成氢键，阻断ATP结合位点，为功能抑制提供结构基础。

图8 ZXYF主要活性成分靶向JAK2的分子对接、分子动力学模拟及分子互作验证

JAK2-STAT3信号轴介导ZXYF对A1型星形胶质细胞极化的抑制作用

回到在体水平，模型鼠海马p-JAK2与p-STAT3分别升高2.9与2.4倍，ZXYF剂量依赖性下调磷酸化水平，而总蛋白不变。为验证通路必要性，研究在共培养模型中加入JAK2激动剂LIF，结果LIF逆转了ZXYF对C3及A1基因集的抑制，并重新升高IL-1β、IL-6、MMP-9，同时破坏TEER、增加渗透，提示ZXYF的保护效应可被JAK2激活“一键清零”。进一步采用siRNA敲低星形胶质细胞JAK2，发现LIF无法再激活STAT3，且ZXYF与敲低本身对A1极化的抑制程度相当，二者无叠加，遗传学层面锁定JAK2为ZXYF作用的上游“总开关”。综合在体-体外-基因三重证据，ZXYF通过阻断JAK2-STAT3信号轴，切断A1型星形胶质细胞的“炎症电源”，从而恢复紧密连接稳态与BBB完整性，最终改善AD认知功能。

图9 JAK2-STAT3信号轴介导ZXYF对A1型星形胶质细胞极化的抑制作用

结语

从《黄帝内经》的“痰蒙清窍”到现代分子影像的“屏障渗漏”，泽泻饮跨越两千年的时空对话，为阿尔茨海默病干预提供了“痰-炎-屏障”整合视角。本研究以“血清化学-网络靶点-多模型验证-基因因果”的递进链，首次阐明ZXYF通过抑制JAK2-STAT3驱动的A1星形胶质细胞极化，修复血脑屏障紧密连接，从而改善认知。这一发现不仅使古方“化痰开窍”获得分子注释，也为临床开发“多靶-单药”型中药提供了可复制的技术路线。未来，围绕stanolone等关键成分的体内过程、人源化BBB-芯片模型及早期临床转化，将进一步推动泽泻饮从实验室走向精准诊疗的一线，为全球数千万AD患者点亮新的希望。

参考文献：

Zhou S, Sun M, Song Z, Qin Z, Wu H, Wang M, Zhu B. Zexieyin formula attenuates Alzheimer's disease via suppressing A1 astrocyte activation: A serum pharmacochemistry and network pharmacology study. Phytomedicine. 2025 Nov 25;148:157375. doi: 10.1016/j.phymed.2025.157375. Epub 2025 Oct 7. PMID: 41106101.