【中西合璧】电针通过抑制星形胶质细胞萎缩改善抑郁症状

深度解析医学证据，DeepEvidence为你支撑决策

摘要

星形胶质细胞萎缩是人类重度抑郁症（MDD）以及抑郁症动物模型中主要的组织病理学特征。本研究显示，电针能够预防慢性不可预见性温和应激（CUMS）小鼠前额叶皮层内星形胶质细胞萎缩，并缓解抑郁样行为。对小鼠进行CUMS处理可诱导抑郁样表型，这一点通过蔗糖偏好实验、悬尾实验和强迫游泳实验得到证实。这些行为学改变伴随着前额叶皮层星形胶质细胞的形态学萎缩，该萎缩通过对表达mCherry的星形胶质细胞进行共聚焦Z轴层扫图像的三维重建分析得以揭示。这种形态学萎缩同时伴随着细胞骨架连接蛋白埃兹蛋白（Ezrin）表达的降低，该蛋白参与构成星形胶质细胞末梢薄板，而末梢薄板形成胶质突触摇篮。对足三里穴（ST36）进行电针干预，以及使用抗抑郁药氟西汀处理，均可预防抑郁样行为、星形胶质细胞萎缩以及星形胶质细胞Ezrin的下调。综上所述，本研究数据进一步支持星形胶质细胞萎缩在抑郁症中发挥主要作用的观点，并揭示星形胶质细胞是电针治疗抑郁障碍的细胞靶点。

引言

星形胶质细胞是中枢神经系统（CNS）主要的稳态细胞，在从分子到器官的各个组织层面维持神经组织的功能。星形胶质细胞呈现复杂的海绵状形态，由大量微小的外周突起（即末梢薄板）从初级及更高阶分支（即主干）发出形成。星形胶质末梢薄板与突触形成接触并构成突触摇篮，以支持和维持突触连接。特别地，末梢薄板上密集分布多种质膜Na⁺依赖性转运体，负责突触间隙内神经递质与离子的稳态调控。此外，星形胶质细胞分泌多种调节突触功能的因子。末梢薄板表现出高度的生理形态可塑性，这种可塑性同样可调节突触传递。在衰老及多种神经病理状态下，末梢薄板收缩会导致稳态支持作用降低、神经递质异常溢出以及突触可塑性受损。伴随末梢薄板减少的星形胶质细胞萎缩在脑衰老中十分显著，并参与多种神经系统疾病的病理生理过程，包括神经退行性疾病、癫痫、成瘾以及情感障碍。应激诱导的星形胶质细胞萎缩是情感障碍，尤其是重度抑郁症（MDD）和创伤后应激障碍中最主要的组织病理学标志。

MDD的药物治疗仍然具有挑战性，许多患者对传统抗抑郁药产生耐药。电针（EA）作为一种有效且安全的治疗手段被用于多种疾病，包括炎症、帕金森病、失眠、焦虑和抑郁。研究表明，对特定穴位大椎（DU14）和百会（DU20）进行电针可恢复阿尔茨海默病小鼠模型的抑制/兴奋平衡并改善认知。多项研究显示，电针通过调节胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达和成纤维细胞生长因子2（FGF2）的产生影响星形胶质细胞，而后者有助于缓解抑郁样行为。

在本研究中，我们使用高分辨率形态学重建分析了健康对照小鼠以及经CUMS暴露后出现抑郁样行为的小鼠前额叶皮层内的原生质星形胶质细胞。我们发现，CUMS可导致星形胶质细胞发生显著的形态学萎缩，并伴随质膜‑细胞骨架连接蛋白Ezrin的表达下调。对这些小鼠进行电针或经典抗抑郁药氟西汀处理可使星形胶质细胞形态正常化、提高Ezrin表达并缓解抑郁样表型。本研究提示，电针可能为MDD提供一种潜在的、靶向星形胶质细胞萎缩的非药物治疗手段。

结果

抑郁模型验证：CUMS触发快感缺失与抑郁样行为

将啮齿类动物暴露于CUMS及其变式是目前广泛使用的抑郁症造模方法。本研究的实验设计包括实验流程时间线和所用穴位位置如图1所示。对小鼠进行4周CUMS处理后，蔗糖偏好显著降低，反映出快感缺失的发生，快感缺失是抑郁症患者的核心症状之一。蔗糖消耗量从对照组的0.88±0.01降至CUMS组的0.58±0.05（p<0.001，n=6）。同样，CUMS处理影响小鼠行为，一系列行为学实验证实了这一点。悬尾实验（TST）和强迫游泳实验（FST）中的不动时间均显著延长：对照组分别为100.1±4.8、58.4±4.0，CUMS组分别为155.1±6.3、139.1±3.09（均p<0.001，n=6）。在旷场实验中，CUMS降低探索行为，表现为总运动距离、中央区累计停留时间和直立次数减少：对照组分别为42.488±4.358 m、18.9±1.2 s、70±3.1次，CUMS组分别为21.153±1.09 m、6.64±1 s、25.5±2.3次（均p<0.001，n=6）。综上，这些数据表明CUMS可诱导小鼠出现抑郁样行为。

抑郁症与星形胶质细胞萎缩相关：CUMS降低形态学指标并降低Ezrin表达

为评估CUMS后星形胶质细胞的形态变化，我们通过立体定位注射AAV5·gfaABC1D·mCherry标记小鼠前额叶皮层（PFC）的星形胶质细胞，从而实现可靠的形态计量分析。对mCherry标记的健康与应激星形胶质细胞进行共聚焦显微镜Z轴层扫图像的三维重建。对星形胶质细胞三维重建结果使用Imaris软件内置的Sholl分析。CUMS处理导致星形胶质细胞大小与复杂度显著降低。最大交叉数从健康组的13.5±0.9降至抑郁组的8.2±0.4（p<0.001，n=15）；星形胶质细胞分支长度从对照组的11.6±0.7 μm降至CUMS组的8.0±0.2 μm（p<0.001，n=15）。同样，CUMS处理显著减小星形胶质细胞功能域面积：对照组为1151.6±44.3 μm²，CUMS组为283.7±13.3 μm²（p<0.001，n=6）。

Ezrin是埃兹蛋白‑根蛋白‑膜突蛋白（ERM）家族成员，可将肌动蛋白丝锚定到质膜，对星形胶质末梢薄板的形成、结构可塑性以及星形胶质细胞‑突触相互作用至关重要。我们使用免疫细胞化学技术对接受mCherry星形胶质标记的小鼠PFC标本进行Ezrin表达定量。与mCherry阳性星形胶质轮廓相关的Ezrin荧光强度在抑郁动物中显著降低：对照组为1201.2±73.4，CUMS处理组为813.0±28.4（p<0.01，n=15）。抑郁动物胞体和分支周围的Ezrin阳性斑点数量与表面积均一致降低：分别从94.7±16.3 μm²降至51.0±6.8 μm²（p=0.016，n=15），从204.8±36.6 μm²降至110.2±13.5 μm²（p=0.018，n=15）。

CUMS会诱导PFC星形胶质细胞的形态萎缩

图1  对调组和CUMS组星形胶质细胞的代表性三维重建。B Sholl对星形胶质细胞形态分析显示了细胞细胞体中部中心的星形胶质细胞分支与同心球的交汇数量。C 控制组和CUMS组星形胶质细胞的最大交点数。D 对照组和CUMS组星形胶质细胞突起的平均长度。每个组的B–D n = 15。E 作为星形胶质细胞沿z轴投影获得的代表性区域示例，供对照和CUMS动物使用。F 对照组和CUMS组的平均星形胶质细胞结构域。所有数据均值为半个± *p < 0.05，**p < 0.01，***p < 0.001。每列标注实验数量。

氟西汀与电针可预防CUMS诱导的抑郁样行为

本研究比较了特定穴位电针与经典抗抑郁药氟西汀（百忧解）的抗抑郁效果。我们发现，氟西汀处理以及对中医传统用于治疗抑郁症的足三里穴（ST36）进行电针干预均可完全预防CUMS暴露小鼠抑郁样行为的发生。具体而言，氟西汀组和电针组小鼠的蔗糖消耗量显著高于CUMS组（氟西汀组：0.8±0.03 vs CUMS组0.6±0.05，p<0.001；电针组：0.8±0.03 vs CUMS组0.6±0.05，p<0.01，n=6）。同样，氟西汀和电针可预防TST和FST中抑郁样行为的发生；两种处理也可预防旷场实验中探索行为的降低。氟西汀与电针的疗效相当，各检测指标无显著差异。同时，注射PBS或假电针（EA1、EA2：无电刺激针刺或非临床有效穴位针刺）均无法预防CUMS处理小鼠抑郁样行为的发生。

氟西汀和EA的治疗可以预防因压力引起的慢性抑郁类行为的发展

图2  蔗糖偏好测试。B TST静止时间。C FST静止时间。D 代表性跑迹测试，观察时间为10分钟。E–G平均值为总距离、中心点时间及养育事件次数。实验组在图表上标示。所有数据均值为半± *p < 0.05，**p < 0.01，***p < 0.001，与对照组相比。每列标注实验数量。

氟西汀与电针可预防星形胶质细胞萎缩并提高Ezrin表达

与预防抑郁样行为同步，氟西汀处理和电针暴露可预防CUMS诱导的星形胶质细胞萎缩以及CUMS诱导的星形胶质细胞相关Ezrin降低。具体而言，接受氟西汀或电针处理的动物，其星形胶质细胞最大交叉数和分支长度显著高于CUMS组（交叉数：氟西汀组14.2±0.5、电针组17±1.0 vs CUMS组8.2±0.4，均p<0.001，n=15；分支长度：氟西汀组13.6±0.6 μm、电针组14.0±0.7 μm vs CUMS组8.0±0.2 μm，均p<0.001，n=15）。同样，氟西汀和电针均可预防CUMS诱导的星形胶质细胞功能域减小（氟西汀组：790.5±43.2 μm² vs CUMS组283.7±13.4 μm²，p<0.001，n=6；电针组：1078.0±62.3 μm² vs CUMS组283.7±13.4 μm²，p<0.001，n=6）。注射PBS或假电针均无法预防CUMS诱导的星形胶质细胞形态改变。

氟西汀和电针对星形胶质细胞相关Ezrin的影响相似。接受氟西汀或电针处理的动物，与星形胶质细胞功能域相关的Ezrin荧光强度显著高于仅CUMS组（氟西汀组：1248.4±140.5 vs CUMS组703.8±19.4，p<0.01，n=15；电针组：1176.14±254.6 vs CUMS组703.8±19.4，p<0.05，n=15）。免疫标记的Ezrin斑点在胞体和分支区域均匀增加。同样，注射PBS或假电针均不影响Ezrin水平。

氟西汀和EA治疗可保留CUMS方案下的ezrin-星形胶质细胞结合

图3  一个代表性的星形胶质细胞谱谱（红色）重建，使用Ezrin puncta（绿色），针对CUMS + 氟西汀、CUMS + PBS、CUMS + EA和CUMS + EA1（假针灸程序）。B 与体细胞及三维重建星形胶质细胞分支相关的ezrin puncta的平均荧光强度及表面积，涵盖多个实验组。实验组在图表上标示。所有数据均值±为对照组的均值 *p < 0.05，**p < 0.01，***p < 0.001。每列标注实验数量。

讨论

慢性应激诱导星形胶质细胞萎缩：对抑郁症的病理生理意义

本研究使用高分辨率形态计量分析证实了既往研究结果：慢性应激可导致多个脑区（包括本研究关注的PFC）星形胶质细胞发生形态学萎缩。在体星形胶质细胞高分辨率形态计量需要使用荧光探针进行胞质标记；该探针可通过微电极（如黄 Lucifer 黄）、膜片钳（如Alexa Fluor 594）注入目的细胞，或在星形胶质细胞特异性启动子（如Aldh1l1或Gfap）驱动下表达。本研究使用mCherry和Gfap启动子进行病毒转染（AAV5‑gfaABC1D‑mCherry）。通过Sholl分析对星形胶质细胞萎缩进行定量，结果显示交叉数显著减少、星形胶质细胞分支长度降低以及星形胶质细胞功能域面积减小。此外，免疫细胞化学结果显示，慢性应激影响星形胶质细胞内Ezrin的存在：CUMS暴露动物中，与单个星形胶质细胞（胞体和分支）相关的标记Ezrin斑点数量显著减少。Ezrin是质膜与细胞骨架的连接蛋白，对星形胶质末梢薄板的形成和形态可塑性至关重要；Ezrin降低会导致末梢薄板数量和/或体积减少。末梢薄板是原生质星形胶质细胞的特征性形态部分，赋予其海绵状或灌木丛样外观。这些末梢薄板具有极高的表面积/体积比且无细胞器，这决定了这些区域内离子信号的特异性（以Ca²⁺内流为主和Na⁺信号突出）。末梢薄板与突触紧密结合，并依靠高密度质膜稳态转运体维持和调控突触传递。

星形胶质细胞萎缩、功能减弱及功能丧失是多种神经系统疾病中明确的星形胶质病理改变。脑内活性环境中星形胶质细胞分布减少会产生多重后果。萎缩的星形胶质细胞打开扩散通道并促进容积传递；在单突触水平，星形胶质末梢薄板分布减少会削弱谷氨酸清除，导致谷氨酸可用性增加（可能产生兴奋性毒性后果）并发生溢出，进而影响突触可塑性。此外，胶质分布减少会限制稳态支持作用，包括谷氨酰胺供给、K⁺缓冲、pH调控以及活性氧清除物质的供应。相反，促进星形胶质末梢薄板生长可增强对突触传递的支持。星形胶质细胞具有高度形态可塑性，多种环境因素可通过增加末梢薄板分布扩大星形胶质细胞功能域。这些环境因素包括丰富环境与体育锻炼、节食以及其他生活方式因素，均可对认知能力产生积极影响。在情感障碍背景下，星形胶质细胞萎缩可导致突触传递异常，并影响神经元存活及整体功能执行。事实上，对星形胶质细胞和星形胶质稳态级联的特异性操控可诱导抑郁样行为，而抗抑郁药处理可挽救这些行为并逆转星形胶质细胞萎缩。本研究证明，电针的作用与化学抗抑郁药高度相似，可预防慢性应激小鼠PFC内抑郁样行为和星形胶质细胞萎缩的发生。

电针作用于星形胶质细胞以预防抑郁？

针灸作为中医治疗手段已有3000–4000年历史；第一部规范针灸治疗的典籍《黄帝内经》约成书于公元前100年。目前针灸已在全球范围内用于多种疾病治疗。针灸被用于神经精神疾病的治疗，包括抑郁症和焦虑症。研究显示，对百会（GV20）、足三里（ST36）或太冲（LR3）、三阴交（SP6）、内关（PC6）、神门（HT7）等穴位进行6周针灸治疗抑郁症的效果与口服氟西汀相当，且针灸的应答率和改善率更优。同样，对ST36和CV4穴位进行针灸可有效缓解动物模型中的抑郁样行为。本研究选择对足三里（ST36，长寿穴）进行电针，该穴位已知与脑相关。针刺此穴位影响脑葡萄糖代谢、调节皮层兴奋‑抑制平衡，并触发多个脑区的响应，包括前扣带回皮层（ACC）、腹外侧前额叶皮层（VLPFC）、枕叶皮层、躯体感觉皮层和中脑。

本研究发现，电针以及氟西汀处理均可完全预防慢性应激小鼠抑郁样行为的发生。为阐明电针可能的脑细胞靶点，我们对抑郁症中发生萎缩的皮层星形胶质细胞进行精细形态的深入分析。如预期所示，对小鼠进行CUMS处理导致星形胶质细胞大小与复杂度显著降低，而氟西汀处理和ST36电针均可完全逆转这一效应。该效应具有特异性，因为假针灸无效。电针（以及氟西汀）处理可预防与星形胶质细胞结构相关的Ezrin降低。因此我们推测，慢性应激导致星形胶质末梢薄板收缩、星形胶质细胞‑突触结合减少，进而损害突触传递和可塑性，这一过程在衰老和多种神经病理状态中均已被证实，并最终导致抑郁样行为的产生。本研究数据得到近期研究结果的支持：电针可恢复慢性应激后星形胶质细胞特异性谷氨酸转运体EAAT2的表达；这种恢复与抑郁样行为的改善同步发生。

针灸信号如何转化为星形胶质细胞形态与功能的改变，从而保护机体免受应激诱导的抑郁性改变？目前我们只能推测。本研究证实，经典抗抑郁药氟西汀可挽救应激诱导的抑郁样行为并预防星形胶质细胞萎缩。氟西汀通过抑制5‑羟色胺转运体SERT/SLC6A4（主要表达于神经元）或直接作用于星形胶质细胞5‑HT₂B受体影响星形胶质细胞。氟西汀对这些受体的激活可启动多条信号通路，并诱导表皮生长因子受体（EGFR）反式激活，进而招募MAPK/ERK或PI3K/AKT下游级联反应，调控与情感障碍相关的多种基因表达。氟西汀还可通过磷酸化并激活星形胶质细胞Na⁺‑H⁺转运体NHE/SLC9a1纠正情感障碍中异常的间质pH。电针是否通过相似级联发挥作用仍需进一步研究。我们仅提示，电针还可通过激活皮层下核团、作用于去甲肾上腺素能或多巴胺能系统发挥效应，这些系统已知可激活特异性星形胶质细胞受体以诱导多种信号级联反应。

结论

综上所述，本研究证实电针可预防慢性应激小鼠抑郁样行为的发生。在细胞和分子水平，电针可预防星形胶质细胞的形态学萎缩（抑郁症最主要的组织病理学特征）以及控制这些细胞精细形态的星形胶质细胞相关Ezrin的降低。因此，本研究首次从实验上为以下观点提供证据：电针通过增强脑内活性环境中的星形胶质细胞分布，保护其免受应激诱导的病理性改变，从而改善抑郁样行为。

材料与方法

实验动物

所有实验均使用C57BL/6小鼠（购自中国成都达硕实验动物有限公司），实验开始时小鼠为7周龄，整个实验流程持续7周。所有小鼠在标准实验室条件下适应环境：室温24±2℃，湿度65±5%，12/12小时光暗循环，自由获取饮水和食物。本研究未使用统计学方法预设样本量，但样本量与已发表文献中的报道相近。所有实验操作均符合美国国立卫生研究院（NIH）实验动物饲养与使用指南，并获得成都中医药大学动物伦理委员会批准（伦理审批号：AM3520，2019年5月8日）。

慢性不可预见性温和应激（CUMS）方案

参照已报道方法，小鼠连续4周、每天接受随机序列的应激刺激。这些应激包括：禁水禁食12小时、鼠笼倾斜45°持续12小时、群居饲养12小时、4℃冷水游泳5分钟、足底电击（1 mA，持续5分钟）、噪音刺激（120 dB，持续3小时）、悬尾5分钟、潮湿垫料12小时、鼠笼振荡（40次/分钟，持续5分钟）、束缚应激1小时。

实验分组与处理

将小鼠随机分为7个实验组：

1. 对照组：不接受任何干预。

2. CUMS组：仅接受CUMS处理。

3. CUMS+氟西汀组：接受CUMS处理，并在整个CUMS周期内每周注射氟西汀，剂量为10 mg/kg。

4. CUMS+PBS组：接受CUMS处理，并每日注射PBS（0.2 ml）。

5. CUMS+电针组：每日接受电针治疗。

6. CUMS+假电针EA1组：每日接受假针刺处理。

7. CUMS+假电针EA2组：每日接受假针刺处理。

电针在每天固定时间（上午10:00–11:00）对清醒小鼠实施。小鼠用两条魔术贴及额外胶带固定在木板上。电针刺激作用于治疗有效的足三里穴位（ST36；小鼠穴位位于膝关节下方、腓骨小头下约2 mm处）。使用穴位神经电刺激仪（HANS‑200，南京济生医疗科技有限公司，中国江苏）输出电流0.5 mA、频率2 Hz，持续刺激30分钟。电针使用不锈钢毫针（长度2.5 cm，直径0.25 mm；苏州华佗医疗器械有限公司，中国江苏），单侧刺入皮下2–3 mm。

假处理设置如下：

• 假电针EA1组：刺入毫针但不施加电刺激。

• 假电针EA2组：将针刺入尾部非穴位点。

行为学测试

蔗糖偏好实验

蔗糖偏好实验是基于奖赏的测试，用于评估快感缺失，操作参照已报道方法。小鼠单笼饲养3天，给予两个50 mL水瓶，一瓶为纯水，另一瓶为1%蔗糖水溶液（质量/体积）。每天调换瓶位以避免位置偏好。禁水禁食24小时后，过夜测定蔗糖或水的偏好量。蔗糖偏好率（%）按如下公式计算：（蔗糖溶液消耗量 /（蔗糖溶液消耗量+水消耗量））×100%。

悬尾实验

悬尾实验是基于行为绝望的测试，用于评估小鼠在无法逃避条件下的不动时长，操作参照已报道方法。每只小鼠距尾尖1 cm处用胶带固定，悬挂于高度20–25 cm处。记录6分钟内的行为表现。由对分组不知情的观察者统计不动时间。小鼠完全静止时判定为不动；沿尾部攀爬的行为不计入。

强迫游泳实验

强迫游泳实验参照已报道方法进行。使用透明玻璃圆筒，尺寸为：高度30 cm，直径20 cm；水位15 cm，水温23–25℃。将小鼠轻轻放入圆筒。记录6分钟内的行为并录像分析。游泳结束后，抓住尾部将小鼠取出，用毛巾轻轻擦干，并在饲养笼中于灯下保温。小鼠停止游泳、仅被动漂浮且头部保持在水面以上时判定为不动。

旷场实验

旷场实验参照已报道方法进行。装置为白色、高密度、无孔塑料制成的方形箱体（50×50×50 cm）。将小鼠轻轻置于箱体中央，记录10分钟内的活动情况。通过连接电脑的摄像头与自动视频追踪程序（EthoVision XT 9.0；Noldus，荷兰瓦赫宁根）记录总运动距离、在旷场中央区与外周区的停留时间。每次实验前后，用95%乙醇彻底清洁箱体并晾干，以消除上一只动物留下的气味线索。

AAV显微注射

在CUMS处理第3周末进行病毒注射，使用立体定位仪（RWD，中国深圳）引导固定有斜面玻璃微电极的汉密尔顿注射器，定位至前额叶皮层（PFC）。注射位点位于双眼与颅骨人字缝连线的中点。进针时与颅骨表面保持垂直，深度约0.2 mm。向小鼠右侧PFC缓慢注射总量0.7 μl的AAV5‑gfaABC1D‑mCherry（1×10¹² gc/mL；上海泰都生物科技有限公司）。玻璃微电极注射后留置至少5分钟。注射完成后，小鼠在升温毯上完全复苏，再放回饲养笼。

免疫组织化学

小鼠在早晨经异氟烷（2%，5分钟）与戊巴比妥钠（1%，50 mg/kg）深度麻醉后，使用冷多聚甲醛（PFA，4%，质量/体积，溶于PBS）进行灌注固定。取脑后进行后固定，并在30%（质量/体积）蔗糖溶液中脱水保护。使用冰冻切片机将脑组织切成45 μm厚切片，切片立即转入保存液（30% 蔗糖+30% 乙二醇，溶于PBS），‑80℃保存备用。游离漂浮切片在封闭液（6%胎牛血清，溶于PBS）中封闭1小时。随后在相同封闭液中加入一抗（兔抗Ezrin，1:100，CellSignalling，美国马萨诸塞州丹弗斯）4℃孵育过夜。PBS洗3次后，切片在含相应二抗（山羊抗兔Alexa 488；Invitrogen，美国加利福尼亚州卡尔斯巴德）的封闭液中37℃孵育1小时。PBS洗3次后，DAPI染核，使用抗荧光淬灭封片剂（Solarbio，中国北京）封片。使用共聚焦显微镜（Olympus，日本东京）或普通荧光显微镜（Leica，德国韦茨拉尔）采集图像。

Sholl分析

Sholl分析是常用的星形胶质细胞突起复杂度定量方法。所有处理步骤使用ImageJ软件完成。简言之，将mCherry标记对应的发射光谱（565–610 nm）Z轴层扫图像（XY轴分辨率512×512像素，0.2 μm/像素；Z轴步长1 μm/帧）重采样，横向统一为0.25 μm/像素。

三维重建

共聚焦图像层扫Z轴步长为0.25 μm。离线使用Imaris 7.4.2软件（Bitplane，美国康涅狄格州南温莎）进行三维重建，方法参照已报道文献。根据细胞自身参数测量并重建星形胶质细胞胞体与突起。突起直径设为胞体直径的1/10。此外，各组Ezrin的测量参数统一设为1 mm。使用Imaris专用插件计算表面‑表面共定位。

统计学分析

所有统计分析使用GraphPad Prism 8完成。所有数据以均数±标准误（mean±SEM）表示，n为行为学实验的动物数量，或来自至少3只小鼠的星形胶质细胞数量。所有分析均为单盲。多组数据的差异显著性使用单因素ANOVA检验，后续进行Holm‑Sidak检验。数据不符合正态分布时，使用Kruskal‑Wallis秩和检验，后续进行Tukey检验。对图2I、3B、6B的数据采用双因素ANOVA，后续进行Dunn检验。显著性水平定义为P<0.05。

中西合璧述评

该研究是针灸抗抑郁机制的高质量基础研究，清晰证明 “电针→保护星形胶质细胞→改善抑郁” 的通路，优点突出、证据扎实。慢性不可预见性温和应激（CUMS）可诱导小鼠出现抑郁样行为，同时引发前额叶皮层星形胶质细胞萎缩，并伴随细胞骨架连接蛋白Ezrin 表达下调，这是抑郁症关键组织病理学特征。电针以星形胶质细胞为细胞靶点，通过抑制其萎缩、维持 Ezrin 介导的末梢薄板结构，保护突触功能，从而改善抑郁。但受动物实验、单穴位、机制不全等限制，仍需进一步完善临床转化与深层机制研究。