【Molecular Therapy】CD96作为AML CAR T治疗靶点极有前景
2026-01-20 聊聊血液 聊聊血液 发表于上海
国内学者开展基础研究，证明 CD96 是 AML 中基于 CAR T 细胞的免疫治疗的一个有前景的靶点。
急性髓系白血病（AML） 是成人最常见的急性白血病，治疗难度大，易复发。白血病干细胞（LSCs） 是AML复发和治疗抵抗的关键，但目前缺乏LSC特异性抗原。CAR T细胞疗法 在B细胞恶性肿瘤中效果显著，但在AML中因靶点与正常造血干细胞（HSCs）重叠而导致毒副作用（骨髓抑制）。
D96 属免疫球蛋白超家族，生理状态下仅低表达于活化 T/NK 细胞；既往研究提示 30–60% AML 患者恶性克隆（尤其 LSC）高表达 CD96，而正常 HSC 基本阴性，因此具备“LSC-选择性”靶向潜力。
国内学者开展基础研究，证明 CD96 是 AML 中基于 CAR T 细胞的免疫治疗的一个有前景的靶点，研究结果近日发表于《Molecular Therapy》。
研究方法
样本来源
人源样本：健康供者外周血单个核细胞（PBMCs）、骨髓CD34⁺细胞；AML患者原代骨髓样本（来自江苏省人民医院和唐都医院）。
细胞系：KG1、Kasumi-1、Skno-1、HL60、U937、K562等AML细胞系；293GP包装细胞系。
实验动物：NOG（NOD/SCID/IL2Rγ⁻/⁻）小鼠，用于构建AML移植瘤模型。
CD96-CAR构建
使用5种不同单克隆抗体的可变区构建CD96特异性scFv。
构建了多种CAR结构，包括不同跨膜域（CD8α或CD28）、共刺激域（4-1BB或CD28）、铰链区长度（短、中、长）的变体。
通过逆转录病毒载体（MSCV）转导T细胞，制备CD96-CAR T细胞。
CAR-T细胞功能评估
体外杀伤实验：使用荧光素酶报告系统或流式细胞术检测CAR-T细胞对AML细胞系和原代AML细胞的杀伤效率。
细胞因子释放：ELISA检测IFN-γ、IL-2、TNF-α等效应因子。
脱颗粒实验：CD107a染色评估CAR-T细胞活化。
长期共培养实验：模拟反复抗原刺激，评估CAR-T细胞持久性与衰竭表型。
体内疗效评估
建立NOG小鼠AML移植模型（U937-CD96低/高表达，或KG1细胞）。
静脉注射CAR-T细胞后，每周通过生物发光成像监测白血病负荷。
记录生存期，检测外周血中CAR-T细胞扩增情况。
安全性评估
正常造血干细胞毒性：共培养实验检测CAR-T细胞对CD34⁺ HSCs的杀伤作用。
集落形成实验：评估CAR-T细胞是否影响HSCs的自我更新能力。
CAR结构优化
引入CD33靶向的嵌合共刺激受体（CD33-CCR），与CD96-CAR联用，增强对CD96低表达AML的杀伤。
其他改造包括：过表达LTBR、c-Jun、IL2RG；更换铰链区长度等。
研究结果
CD96在AML中特异性表达
48.3%的AML患者表达CD96，其中 31.4% 为“高表达”；LSCs表达量显著高于白血病原始细胞。
正常HSCs几乎不表达CD96，提示其作为选择性靶点的潜力。
CD96-28z CAR-T细胞表现出最优活性
含CD28跨膜域与共刺激域的CAR（尤其是15-28z）在体外展现出更强的增殖、杀伤能力和细胞因子分泌。
在长期共培养中，CD96-28z CAR-T细胞能够反复清除肿瘤细胞，且衰竭标志物表达较低。
CD96-CAR T细胞有效杀伤原代AML细胞
对CD96阳性AML患者的原始细胞和LSCs均具有显著杀伤作用，且对正常 CD34⁺ HSC 无溶破、无细胞因子释放，CFU 集落形成能力与未处理组相当；而 CD123-CAR 显著抑制正常造血。
体内实验证实疗效与CD96表达水平相关
CD96-28z CAR-T细胞能有效控制CD96高表达AML，延长小鼠生存期。
对CD96低表达AML疗效有限，CAR-T细胞扩增不足。
CD33-CCR增强对CD96低表达AML的疗效
联合CD33-CCR后，CD96-28z CAR-T细胞对CD96低表达AML的杀伤能力显著提升。
体内实验显示，联合疗法能更有效地控制白血病进展，且不影响正常造血功能。
安全性良好
CD96-CAR T细胞及CD96-28z+CD33-CCR T细胞均未对正常CD34⁺ HSCs或CD33⁺髓系祖细胞造成明显杀伤。
集落形成实验进一步证实其安全性。
总结
该研究系统性地验证了CD96作为AML CAR-T疗法靶点的可行性与优势：
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靶点选择性高：CD96在AML LSCs中高表达，在正常HSCs中不表达，减少“脱靶”毒性风险。
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CAR结构优化：CD28基CAR（CD96-28z）表现出更优的活化与持久性。
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联合策略增强疗效：通过引入CD33-CCR，有效克服了CD96低表达AML的治疗瓶颈。
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安全可控：在体外和体内实验中均显示对正常造血系统无显著影响。
CD96是一种有前景的AML免疫治疗靶点，CD96-28z CAR T细胞联合CD33-CCR的策略，为CD96阳性AML患者提供了一种高效且安全的新型治疗选择，尤其适用于CD96高表达或低表达但CD33阳性的患者。
参考文献
Gao X, Liu H, Li G, Zhou Y, Dong Y, Chen X, Fan W, Li E, Wang S, Luan Q, Zhang J, Jin H, Liao H, Luo Y, Liu L, Qin W, Ren J, Li J, Fan L, CD96 as a Therapeutic Target for CAR T-Cell Therapy in Acute Myeloid Leukemia, Molecular Therapy (2026), doi: https://doi.org/10.1016/ j.ymthe.2025.12.058.
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