J Vis Exp：基于质谱的蛋白质组学样品制备分析眼部微血管
2019-04-30 不详 网络
美因茨约翰内斯古腾堡大学医学中心眼科的Perumal N等人近日在J Vis Exp杂志上发表了一篇文章，他们优化了眼部微血管质谱分析的样本制备流程。
美因茨约翰内斯古腾堡大学医学中心眼科的Perumal N等人近日在J Vis Exp杂志上发表了一篇文章，他们优化了眼部微血管质谱分析的样本制备流程。
使用先进的技术方法在体外分离眼部血管来破译眼睛的生理病理状态，这极大地扩展了我们对某些疾病的理解。基于质谱（MS）的蛋白质组学已经成为解释健康和疾病状态下血管分子机制和蛋白质信号传导途径改变的有力工具。然而，MS分析前的样品制备步骤对于获得可重复的实验结果十分重要，同时对复杂蛋白质组的深入阐明也是至关重要。这对于眼部微血管的制备尤其重要，其中可用于分析的样品量通常是有限的，因此对蛋白质的最佳量提取提出了挑战。
本文从猪睫状体后动脉提取蛋白进行质谱分析，作为眼球后血管有效、快速和稳健的样品制备方案案例。本方法在均质化后样品上清液和沉淀物的蛋白质提取程序上进行完善，在一维凝胶电泳之前用离心过滤装置清洗样品，在液相色谱 - 电喷雾电离中进行无标记定量的肽纯化步骤，即线性离子阱Orbitrap MS系统优化。
最后，作者总结称虽然这种方法是专门针对眼部微血管的蛋白质组学分析而开发的，但也提供了令人信服的证据，表明它也可以很容易地用于其他组织的样品。
原文出处：
Perumal， N.， et al.， Sample Preparation for Mass-spectrometry-based Proteomics Analysis of Ocular Microvessels. J Vis Exp， 2019(144).
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