Clinica Chimica Acta:家族性地中海热的分子诊断

2019-10-17 gladiator MedSci原创

长程PCR (LR-PCR)用于扩增基因组的靶区。本研究旨在建立利用LR-PCR和大规模并行测序(MPS)技术进行靶向基因测序。

长程PCR (LR-PCR)用于扩增基因组的靶区。本研究旨在建立利用LR-PCR和大规模并行测序(MPS)技术进行靶向基因测序。

研究人员选择14 kb长的MEFV基因,包括整个编码外显子作为靶基因,采用LR-PCR扩增。评价分析因素包括LR-PCR条件、三种pcr后清除方法、两种MPS文库制备方法。

LR-PCR条件下,Tks Gflex DNA聚合酶在7 min (30-s/kb)退火/扩增条件下,加入100 ng基因组DNA,产量最高。在pcr后纯化方法方面,基于磁珠的方法具有较高的回收率和纯度。在MPS文库制备方法中,基于配体的方法具有较高的靶基覆盖率(94.58%)、均匀性(99.95%)和无链偏倚的靶基覆盖率(97.40%)。采用链接法和转座子法检测Sanger测序确定的外显子变异。

本研究对各种分析因素进行了评估,建立了利用LR-PCRMPS进行靶向基因测序的流程。这些数据可以使用LR-PCRMPS优化靶向测序。

原始出处:

Takayuki IshigeSakae ItogaEvaluation of analytical factors associated with targeted MEFV gene sequencing using long-range PCR/massively parallel sequencing of whole blood DNA for molecular diagnosis of Familial Mediterranean fever

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  1. 2019-10-18 yjs木玉

    好好好好好好

    0

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