J Pharmacol Sci：基于网络药理学结合体内外实验验证的知母对TMT诱导阿尔茨海默病小鼠模型的保护作用研究

背景：阿尔茨海默病（AD）是一种神经退行性疾病，神经保护是改善AD预后的重要途径。知母（RAA）是一种常用的中药，具有一定的神经保护作用，但其抗AD的机制有待进一步探讨。

目的：探讨RAA对TMT诱导的AD小鼠的神经保护作用机制。

方法：通过腹腔注射TMT建立AD小鼠模型。采用Morris水迷宫（Morris Water Maze，MWM）和y迷宫（Y-maze）测试评估RAA对大鼠学习记忆的改善作用。采用血红素-伊红（HE）染色、尼氏染色、TUNEL染色观察RAA的神经保护作用。采用UPLC-Q-Orbitrap ms检测血清中含有RAA的组分（RAA-S），通过网络药理学和分子对接预测潜在靶点。

采用ELISA试剂盒检测血清活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）水平。利用l-谷氨酸（L-Glu）损伤的HT22海马神经元细胞系进一步阐明RAA的作用机制。采用2'-7'-二氯双氢荧光素（DCFH-DA）荧光探针和流式细胞术检测HT22细胞的ROS水平。流式细胞术检测HT22细胞凋亡。Western blotting检测MAP2、GAP-43、Nrf2、Keap1、HO-1、Bax、Bcl-2蛋白的表达。采用免疫荧光染色法观察Nrf2核易位。

结果：RAA显著增加了小鼠在W区的停留时间，提高了TMT处理小鼠的正确交替率。RAA保留了神经细胞的完整和有序排列。RAA-S共检测到12种成分。AKT1、PPARG、CASP3、STAT3、HSP90AA1和NFE2L2（Nrf2）参与RAA-S靶点通路网络。分子对接发现Nrf2与RAA-S中各组分的平均结合能最高。

在体内，RAA提高了MAP2，GAP-43，Nrf2和HO-1水平，以及GPx，GSH和SOD活性。此外，RAA降低了血清中MDA和ROS的水平，而这些水平已经被TMT升高。在体外，RAA-S可减少TMT引起的HT22细胞凋亡和ROS积累。此外，RAA-S可促进L-Glu损伤HT22细胞中N-Nrf2和HO-1的表达。

结论：RAA可减轻TMT和L-Glu诱导的AD模型小鼠氧化应激，其潜在机制与Nrf2/Keap1-HO-1通路的激活有关。

原始出处：

Huang Q, Zhang Y, Huang L, Guo Z, Wu D. Research on the protective effect of Rhizoma of Anemarrhena asphodeloides on TMT induced AD mice model based on network pharmacology combined with in vitro and in vivo experimental validation. J Pharmacol Sci. 2025;157(2):75-87. doi:10.1016/j.jphs.2024.12.005