宫颈癌早筛早诊双基因甲基化检测，辅助宫颈病变早筛早诊及管理

2022 年，我国子宫颈癌新发病例达 15.07 万例，死亡病例 5.57 万例，这两项数据分别约占全球总数的 22.7% 和 16.0%，其中新发病例在国内女性恶性肿瘤新发病例中位居第 5 位。我国正面临着严峻的子宫颈癌疾病负担，不仅新发病例和死亡病例数量庞大，而且相关数据呈持续升高趋势，同时发病年龄年轻化趋势显著。早期避免漏诊、及时诊治癌前病变及早期浸润癌，是降低宫颈癌发病与复发率、提升患者生存率并保护女性生育力的关键。2023 年 3 月，PAX1 与 JAM3 双基因甲基化检测试剂盒获国家药品监督管理局（NMPA）批准上市，为宫颈癌早筛早诊提供了新选择。

“宫颈癌早筛早诊双基因甲基化检测”项目，对PAX1和JAM3两个宫颈癌标志基因进行DNA甲基化检测，辅助宫颈病变早筛早诊及管理。

现有宫颈癌常规筛查手段具有局限性

宫颈上皮内瘤变（CIN，Cervical intraepithelial neoplasia）因发生在宫颈癌之前，也称为“宫颈癌前病变”。依据2014年第4版WHO分类中鳞状上皮内病变的两级分类，子宫颈上皮内病变分为低级别鳞状上皮内病变（low-grade squamous intraepithelial lesion，LSIL），包括子宫颈上皮内瘤变1级（CIN1）；高级别鳞状上皮内病变（high grade squamous intraepithelial lesion，HSIL），包括子宫颈上皮内瘤变2级或3级（CIN2，CIN3）。

目前，宫颈癌常规筛查途径主要遵循宫颈液基薄层细胞学检查（TCT）和HPV筛查、阴道镜检查及子宫颈活检组织病理学检查的“三阶梯”模式进行。然而这些检测技术均存在一定的局限性。

细胞学敏感度不足容易漏诊：

细胞学对宫颈上皮内瘤变（CIN）2及以上（CIN2+）具有一定特异性，但灵敏度低，且与细胞病理学医师的经验和主观性有关，受取材、制片、患者年龄及病变本身的影响较大。在异常细胞学涂片中，无明确诊断意义的不典型鳞状细胞（ASC-US）占50%以上，容易发生诊断不足或过度诊断。另外绝经与治疗后妇女3型转化区造成细胞学检查漏诊严重。

HPV一过性感染恐慌：

HPV感染虽然是导致子宫颈癌的主要因素，但80%HPV感染为一过性，具逆转性，只有HPV持续感染数年到十数年才会进展到子宫颈癌，HPV阳性结果的过度解读结果容易造成被筛查者的心理负担和过度诊疗。非HPV相关宫颈癌发病率越发趋高，但HPV无法检出。

阴道镜对绝经及3型转化区女性易漏诊：

阴道镜检查存在主观性。当阴道镜为低级别印象及TZ3型时，CIN2、CIN3的漏诊率为52.6%和31.6%。对子宫颈癌筛查异常者，尽管阴道镜下活检病理为LSIL者，仍有10%的HSIL漏诊可能。国内研究发现，阴道镜表现为低级别印象时，检出HSIL达27.3%-29.9%。国外研究也提示，对细胞学ASC-US/LSIL转诊阴道镜检查，在阴道镜为低级别印象者中可检出9.9%的CIN2+。

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根据2011年国际阴道镜联盟的宫颈阴道镜术语，阴道镜检查时需要首先进行总体评估，包括三个项目：阴道镜检查是否充分、鳞柱交界是否可见、以及转化区类型。子宫颈转化区的识别：子宫颈转化区（transformation zone，TZ）是宫颈HSIL，镜下观察的重点，依据新鳞柱交接部（squamo-columnar junction，SCJ）及其可见性分为三种类型。1型转化区（TZ1）：SCJ位于子宫颈外口或子宫颈外部，完全可见；2型转化区（TZ2）：SCJ有部分位于子宫颈管内，但通过暴露后全部可见；3型转化区（TZ3）：SCJ位于子宫颈管内，仅部分可见或完全不可见。

什么是DNA甲基化？为何选择DNA甲基化?

DNA甲基化是一种最常见的表观遗传现象，在不改变核酸序列的情况下，遗传表现发生改变。DNA甲基化属于表观遗传学的甲基化水平和模式改变，将有机会导致抑癌基因的表达被关闭，或原癌基因的表达被激活。癌组织常观察到特定抑癌基因被高度甲基化造成基因失活，PAX1/JAM3是检测基因启动子区的甲基化。根据研究指出，这样的表观遗传修饰改变可能比宫颈癌的遗传改变发生得早, 并且在低级别上皮内病变（LSIL）就可能发生，意味着针对特定基因DNA甲基化水平的检测在宫颈癌的辅助诊断及分流中具备高潜在应用价值。因此，特定DNA甲基化位点的水平检测是肿瘤早期诊断、预后预测和治疗应用的重要生物标志物之一。

DNA甲基化检测具有许多优势，包括具有比TCT、阴道镜、病理检查更高的灵敏度和特异性，且减少结果判读中人为因素的干扰；使用宫颈脱落细胞作为检测样本，宫颈管内、阴道穹窿等部位和3型转化区等的癌症或癌前病变易脱落细胞，这些细胞在宫颈口处堆积，可避免由于阴道镜漏查或者病理取材不满意等的漏诊；DNA甲基化长时间能保持相对稳定状态，在各类型样本存在(如: 血液、体液及石蜡等)，因此成为近年来研究疾病的重要标志物之一。

PAX1联合JAM3双基因甲基化检测的临床意义和应用场景

PAX1是一族编码成对结构域转录因子的发育调控基因、上皮细胞癌关联基因，其基因的突变和缺陷都可导致个体发育异常，PAX1尤其适用于宫颈鳞癌。JAM3是生长发育调控基因，常在癌症中看到其表达下降，可为抑癌关联基因，JAM3补充了宫颈腺癌的检出，并且JAM3基因甲基化可以区分1-2年的HPV一过性感染或3年以上的持续感染。

共识指南怎么说？

在2023年4月发布的《中国子宫颈癌三级规范化防治蓝皮书》中详细介绍了宫颈癌甲基化的一些相关基因，其中包括JAM3和PAX1基因。该书还明确了临床应用方向：1、对高危型HPV的分流，因为HPV感染并不代表病变，甲基化阳性提示CIN2级及以上病变，避免HPV阳性患者的恐慌，也能辅助提高阴道镜活检检出率；2、对育龄期女性生育需求的管理，如果CIN2级女性的甲基化显示阴性，结果对患者来说更好一些，提示其一年内转阴率更高，可以首选物理治疗或紧密随访，避免过度治疗影响生育；3、对微异常细胞学的分流（LSIL及ASCUS），避免患者细胞学是轻微异常而产生的漏诊，同时也避免一些腺癌由于腺细胞脱落不足导致的细胞学检测不出；4、3型转化区及腺癌患者管理，避免由于宫颈萎缩或术后导致的3型转化区而使隐匿、微小病变漏诊，以及发病隐匿的腺癌漏诊。

《肿瘤DNA甲基化标志物检测及临床应用专家共识》推荐了子宫颈癌DNA甲基化筛检临床路径：1、HPV 阳性高风险或细胞学异常女性的分层管理；2、宫颈3型转化区与潜在腺癌病人风险评估；3、用于病变（癌）治疗后的随访监测，患者进行病变（癌）锥切术或者药物治疗后，可通过甲基化结果的阴阳性及数值判断治疗的有效性及复发风险；4、≥65岁女性退出宫颈癌筛查计划前的评估，如果检测甲基化阴性，更放心退出筛查。路径图推荐以上这些人群使用甲基化单独或联合HPV进行检测，检测到阳性再转诊阴道镜，阴性定期随访。如甲基化阳性，组织病理是CIN1或正常，考虑可能基因比病理早6-18个月表现，定期随访避免病变积极进展。

《子宫颈癌PAX1联合JAM3双基因甲基化检测流程、报告及临床应用专家共识》指出，基因甲基化水平改变是一种新型、便捷、无创的子宫颈癌检测方案，具有临床可行性。PAX1联合JAM3双基因甲基化检测作为辅助诊断，将提高子宫颈癌和病变筛查和诊断的准确性。PAX1联合JAM3双基因甲基化检测具有重要意义：1、甲基化水平变化提示HPV持续感染；2、甲基化检测应用于子宫颈病变辅助诊断；3、甲基化检测用于hrHPV 阳性或细胞学无明确诊断意义的不典型鳞状细胞（ASC-US）分流。

《中国子宫颈癌筛查指南（二）》推荐，HR-HPV初筛时，甲基化检测可用于12种高危HPV检测阳性人群的分流，从而降低阴道镜的转诊。

《基于临床需求的宫颈癌基因检测规范化选择中国专家共识（2025年版）》指出，宫颈癌患者肿瘤抑制基因、转录因子和细胞周期调节基因的启动子区甲基化，导致抑制基因功能失活和转录抑制，促进肿瘤侵袭和转移。DNA甲基化检测可作为宫颈癌筛查和癌前病变（CIN2+）分流管理的重要工具，特别适用于HPV阳性或细胞学异常的患者，以提高检测特异度，减少不必要的阴道镜检查。推荐意见1：HPV-DNA联合细胞学检测是宫颈癌一线筛查手段。HPV E6/E7 mRNA检测和甲基化检测可以弥补传统检测手段的不足，有助于区分HPV感染状态；甲基化检测具有不亚于TCT的灵敏感和特异度，两者单独或联合可用于分流HR-HPV阳性患者。

相关临床试验数据：

在一项由北京协和医院（牵头)、浙江大学医学院附属第二医院、浙江省人民医院共同完成的上市前临床试验中，共入组了1986例临床样本，针对30岁以上12种非16/18型高危型HPV感染的样本共有974例。研究表明，与组织病理学金标准相比，PAX1&JAM3双基因甲基化检测对CIN2+的检测灵敏度为89.60%，特异性为96.50%；CIN3+的检测灵敏度为95.96%，临床特异性为87.09%。

近期，PAX1/JAM3双基因甲基化检测技术在宫颈癌筛查中的最新临床研究成果在第37届国际乳头瘤病毒学术大会（IPVS 2025）上亮相，标志着中国宫颈癌筛查创新技术获得了国际学术界的高度认可。本次发表的多中心研究覆盖超过27,000例受检者，研究结果令人振奋：一、检测准确率高达86.5%：能精准识别高级别癌前病变；二、特异性达93.5%：有效排除无需治疗的低风险人群；三、大幅减少不必要检查：将不必要的阴道镜检查从74%降至17%；四、癌症检出率100%：检出全部139例宫颈癌，包括传统方法容易漏诊的23例腺癌。这意味着该技术不仅能准确找出真正有问题的患者，还能避免让健康人群接受不必要的进一步检查，既提高了检出率，又减轻了受检者的身心负担。

另一项研究基于北京协和医院领衔的METHY3和METHY4两项多中心前瞻性研究，纳入1307名非16/18型高危HPV感染女性。受试者接受HPV基因分型、LBC（传统液基细胞学）和PAX1/JAM3双基因甲基化检测，最终通过病理诊断确认病变等级。PAX1/JAM3双基因甲基化检测在CIN3+风险预测中表现最佳，阳性者风险高达39.3%，阴性者仅0.9%。相比之下，LBC阳性者风险仅9.8%，而其转诊率却高达61.9%。PAX1/JAM3双基因甲基化检测阳性转诊率仅17.4%，显着降低过度筛查风险。PAX1/JAM3双基因甲基化检测是唯一对CIN3+具有显著独立预测作用的因素（OR=68.07）。结合HPV33/35分型后，CIN3+风险提升至50%，筛查效率显著提升，特别适用于细胞学资源不足的基层地区。

采样注意事项

通过宫颈刷收集宫颈脱落细胞，并存在保存液中。

1、取样时间：两次例假间隔均可以，如果有阴道用药，则需停药后3-5天再取样；

2、取样节点：如取多管细胞（建议甲基化用第一管或第二管细胞），例如门诊建议第一管TCT，第二管甲基化，第三管HPV；阴道镜室建议阴道镜前采样（若已阴道镜检查，2周后采样）；病房建议在术前，术后随访（锥切手术，3个月后采样）；放化疗前及结束7天。

适用人群及检测意义

参考文献：

[1]EFFICACY EVALUATION OF CISCER FOR CERVCAL CANCER SCREENING: A MULTICENTER STUDY IN CHINA (D 762)

[2]Su, H., Jin, X., Kong, L. et al. The triage role of cytological DNA methylation in women with non-16/18, specifically genotyping high-risk HPV infection. Br J Cancer (2025). https://doi.org/10.1038/s41416-025-03005-5.