J Virol Methods.:上海巴斯德所在肠道病毒EV71衣壳蛋白研究中取得新进展

肠道病毒71型(EV71)是引起手足口病的主要病原体。手足口病是常发于5岁以下儿童的传染性疾病，部分患者会出现脑炎、肺水肿以及瘫痪等严重神经症状，甚至死亡，严重威胁我国儿童的健康，但目前还没有商品化的EV71疫苗来有效防治该疾病。

EV71是单链正义RNA病毒，其病毒颗粒为球形，具有一个对称二十面体状的蛋白质外壳，称为衣壳。病毒衣壳主要起到保护病毒RNA，协助病毒感染的作用。同时，病毒衣壳通常具有良好的抗原性，能够有效诱发机体的体液免疫与细胞免疫应答，起到免疫防御作用，是疫苗研究的主要靶标之一。因此，深入开展EV71病毒衣壳蛋白研究，将为尽快开发出安全有效的EV71疫苗提供重要信息和帮助。

上海巴斯德研究所疫苗学与抗病毒策略课题组博士研究生刘庆伟等在黄忠研究员的指导下，制备出针对EV71衣壳亚基蛋白的一系列多克隆抗体，并利用这些特异性抗体研究了EV71病毒颗粒衣壳蛋白组成情况以及衣壳的组装过程。结果显示，纯化的无感染性病毒颗粒衣壳由VP0、VP1和VP3三个亚基蛋白共同组装而成，而感染细胞裂解液中具有感染性的病毒颗粒衣壳蛋白除了VP0、VP1和VP3外，还检测到了VP0的切割产物VP2，提示VP0被切割为VP2和VP4与病毒的感染能力有重要相关性。利用三种亚基蛋白特异性抗体进行免疫荧光实验的结果显示，病毒衣壳亚基蛋白共定位于被感染细胞的细胞质中，说明病毒衣壳在感染细胞胞质中组装。

该项研究不仅加深了对EV71衣壳蛋白构成及组装的认识，而且为EV71的临床诊断、新型疫苗开发和质量控制、以及分子病毒学研究提供了新的研究工具和手段。研究成果于10月6日在国际学术刊物 Journal of Virological Methods 在线发表。研究工作得到中国科学院“百人计划”的经费支持

doi: 10.1016/j.jviromet.2012.09.024

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Characterization of enterovirus 71 capsids using subunit protein-specific polyclonal antibodies

Liu Q, Huang X, Ku Z, Wang T, Liu F, Cai Y, Li D, Leng Q, Huang Z.

Enterovirus 71 (EV71), a member of the Enterovirus genus of the Picornaviridae family, is one of the major causative agents of hand-foot-and-mouth disease (HFMD), which is prevalent in the Asia-Pacific region. In this article, a set of capsid subunit protein-specific antibodies was used to characterize the EV71 structural protein processing and to determine the composition and assembly of EV71 capsids. SDS-PAGE and Western blot analyses showed that the capsids of a purified EV71 preparation, which lacked viral infectivity, were composed of processed VP0, VP1 and VP3, all of which co-assembled into particles. Analyses of infectious EV71-containing cell lysate revealed the presence of VP2, in addition to VP0, VP1 and VP3, suggesting that the cleavage of VP0 into VP2 and VP4 is important for infectivity. Immunofluorescent staining with the three specific antibodies demonstrated that the capsid subunit proteins co-localized in the cytoplasm of cells infected with EV71. The results add new information on the processing, assembly and localization of EV71 capsid proteins, and demonstrate the usefulness of the capsid protein-specific antibodies for virological investigation and for development of vaccines and diagnostic reagents

(责任编辑：yan.mao)