一文总结，临床常用免疫组化标记物及意义

​常用免疫组化标记物临床意义一览表

一、乳腺癌常用免疫组化标记物解读：

1、雌激素受体(estrogen receptor，ER)、孕激素受体(progesterone receptor，PR)：

ER和PR属于核激素受体家族成员，与配体结合后具有转录因子的作用。在乳腺癌的发生发展中起到重要作用。乳腺癌的病理报告中常规对ER、PR的表达情况进行评价，以指导患者的临床内分泌治疗方案。70%～80%的浸润性乳腺癌表现为ER、PR阳性。

循证医学证据显示，ER、PR免疫组化的肿瘤细胞阳性率达到1%时与临床内分泌治疗的疗效显著相关，因此对其免疫组化结果判读标准定为：≥1%肿瘤细胞核着色为阳性，建议行内分泌治疗，但2015年St Gallen共识中提出ER为1%～9%属于不确定状态，这部分患者是否需要接受内分泌治疗，还需结合其他情况综合考虑。<1%的肿瘤细胞着色或无着色为阴性。另外，对于PR的表达，有研究表明PR阴性与PR为1%～19%阳性的患者在临床病理特征上没有明显差别，St Gallen共识中也曾指出在乳腺癌分型中以20%作为PR表达高低的临界值，区分腔面A型与B型乳腺癌。报告中还应包括阳性百分比及表达的强弱。

2、人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2，HER2)：

HER2蛋白是一种酪氨酸激酶受体，属于表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)家族，HER2/neu癌基因的扩增与肿瘤细胞的生长、增殖、迁移和侵袭相关，大约20%的乳腺癌中存在过度表达。最常用的HER2检测方法为免疫组化和荧光原位杂交法(FISH)，分别检测HER2蛋白的过表达和基因扩增情况。

免疫组化的判读标准为：

• 无着色或≤10%的浸润癌细胞呈现不完整的、微弱的细胞膜染色为阴性(0)；

• >10%的浸润癌细胞呈现不完整的、微弱的细胞膜染色为阴性(1＋)；

• >10%的浸润癌细胞呈现不完整的和/或弱～中等强度的细胞膜染色，或≤10%的浸润癌细胞呈现强而完整的细胞膜染色为不确定(2＋)；

• >10%的浸润癌细胞呈现强、完整、均匀的细胞膜染色为阳性(3＋)。

对于免疫组化不确定的病例(阳性2＋)需进行荧光原位杂交(FISH)进一步检测，也可选取不同的组织块重新检测。研究表明，免疫组化检测HER2蛋白水平与FISH检测基因状态的一致率为95%。

3、雄激素受体(androgen receptor, AR)：

是细胞核内蛋白质，以高亲和性和低能量结合活化的雄激素，激素－受体复合物能与特异的DNA序列(雄激素的反应成分)相互作用来调节靶细胞的雄激素特异反应基因的表达。AR还可以通过生长因子促分裂素原活化蛋白激酶(MAPK)－ER/PR信号通路参与乳腺癌的发育，并调节乳腺癌的细胞增殖。AR在乳腺癌中的表达率30%～90%，但在不同类型乳腺癌中阳性率差异较大，并且AR阳性与较低的增殖活性、组织学分级和淋巴结转移数目有关，在乳腺癌中，AR是一个重要的预后指标。

4、ki-67增殖指数：

Ki-67是一种与细胞增殖相关的核抗原，与肿瘤的增值、浸润、转移潜能和预后密切相关，分布在细胞核中。细胞的增殖与肿瘤的发生、浸润、种植及转移过程密切相关，因此，ki-67成为判断多种实体肿瘤预后的一个较好指标。在乳腺癌中，ki-67高表达与高复发风险相关，提示预后较差，对患者的化疗反应性也有一定的预测价值，但对其评价标准一直存在争议。2011年St Gallen共识提出将14%作为ki-67指数的临界值，但由于没有更多的研究支持，引起广泛争议；2013年，大部分专家同意采用20%作为临界值；2015年St Gallen会议中部分专家认为临界值在20%～29%的区间段可用来区分腔面A型和B型，但另一部分专家认为ki-67指数不能作为分型标准。因此，ki-67的判读及评价标准还需进一步得到统一。

5、E-钙黏蛋白( E-cadherin)：

E-cadherin是一种细胞黏附蛋白，在正常乳腺组织中表现为腔面细胞的细胞膜阳性。浸润性导管癌中表现为E-cadherin中等强度的细胞膜阳性，而在大部分浸润性小叶癌中表达缺失，因此是目前作为小叶癌和导管癌鉴别诊断中最有价值的免疫组化标志物。另外，p120也可以用于导管癌和小叶癌的鉴别，作为E-cadherin的补充。在导管癌中p120表现为细胞膜染色，小叶癌中表现为细胞质染色。

6、EGFR：

EGFR是一种相对分子质量为170 000的膜蛋白，由一个能结合表皮生长因子的胞外功能区、一个短的穿膜区和一个具有酪氨酸激酶活性的胞内区组成，与之结合的配体有表皮生长因子、转化生长因子、双调蛋白等。EGFR与配体结合后形成同源或异源二聚体，激活内在的酪氨酸激酶活性，使自身的酪氨酸残基发生磷酸化，与下游含SH2结构域和PTB区域蛋白结合，激发信号级联反应，促进细胞从G1期过渡到S期，EGFR在细胞增殖中发挥重要作用。以EGFR为靶点的肿瘤治疗主要为以EGFR胞外区为靶点的单克隆抗体，另一种可特异性抑制EGFR激酶活性的小分子酪氨酸激酶抑制剂。在乳腺癌中，EGFR过表达提示生存期短，激素疗效差。

7、细胞角蛋白5/6(CK5/6)、p63、碱性调宁蛋白(Calponin)、平滑肌自身抗体(SMA)等：

均为肌上皮标志物，主要用于导管原位癌及导管内乳头状肿瘤的诊断和鉴别诊断。CK5/6和EGFR在三阴性乳腺癌中表达率高，主要用于基底细胞样乳腺癌的诊断。

8、BRCA1/BRCA2基因检测的临床意义和解读要点

二、胃肠间质瘤免疫组化标记物解读：：

三、肺神经内分泌肿瘤免疫组化标记物解读：：

推荐使用于诊断肺神经内分泌肿瘤免疫组织化学标志物组合为突触素、嗜铬粒素、CD56、甲状腺转录因子1(TTF1)、Ki-67，其中前3种属于神经内分泌标志物。

1、突触素是一种位于突触前泡中的跨膜糖蛋白，属于特异性较强的神经内分泌标志物，但当肿瘤分化差时会弱表达或不表达，或当标本固定不当、固定时间过长时也会造成抗原丢失。嗜铬粒素是位于神经内分泌颗粒中的一组酸性糖蛋白，包括嗜铬粒素A、B、C 3个家族成员，其中嗜铬粒素A(CgA)含量最为丰富，也最常用于免疫组织化学检测。CD56是一种神经细胞黏附分子膜蛋白(neural cell adhesion molecule, Leu19)，广泛分布于神经细胞、神经内分泌细胞和伴有相关分化的肿瘤中，是最为敏感但缺乏特异性的神经内分泌标志物。在分化差的肺神经内分泌肿瘤中，当其他神经内分泌标志物不表达时，CD56是较为有效的辅助诊断指标。

上述3种神经内分泌标志物在不同分化程度的肺神经内分泌肿瘤中表达率各不相同，有统计显示在类癌(包括典型类癌和不典型类癌)、小细胞癌、大细胞神经内分泌癌中突触素表达率分别为91%、54%、87%；CgA的表达率分别为93%、37%、69%；CD56的表达率分别为76%、97%、92%，而在肺的非神经内分泌肿瘤中包括腺癌、鳞状细胞癌以及大细胞癌中，这些标志物表达率一般均低于10%。可见CD56对于高级别肺神经内分泌肿瘤有较高的表达率，突触素和CgA在类癌类型肿瘤中是较好的标志物。

2、TTF1在肺神经内分泌肿瘤的表达情况大致为：典型类癌和不典型类癌35%，大细胞神经内分泌癌50%，小细胞癌85%～90%。TTF1主要表达在分化差或高级别神经内分泌癌，包括诸如泌尿生殖系统、乳腺及消化系统、前列腺等肺外器官高级别神经内分泌癌。

3、增殖活性标志物：Ki-67蛋白在细胞增殖周期调控方面起着关键作用，尤其高表达于G2期和M期。Ki-67抗体有多个商业化克隆，包括单克隆和多克隆，目前市场上应用最为广泛的为单克隆MIB-1。在神经内分泌肿瘤方面，用于消化道研究报道较多，并于2010年WHO消化道神经内分泌肿瘤分类中用于分级诊断指标之一。Ki-67用于肺神经内分泌肿瘤研究也有不少报道，Pelosi等对多达25篇肺神经内分泌肿瘤Ki-67研究报道荟萃分析，发现不同类型肺神经内分泌肿瘤之间Ki-67指数有重叠；Ki-67与核分裂指数有相关性，但又不完全平行；由于不同部位神经内分泌肿瘤生物学行为也不尽相同，目前尚不能用其他系统分级标准来诊断肺神经内分泌肿瘤。手术切除标本应选择热点区进行Ki-67计数，范围是3个2 mm2热点区，活检标本则要计数全部肿瘤细胞。

4、其他标志物：神经元特异性烯醇化酶(NSE)、蛋白基因产物(protein gene product 9.5, PGP 9.5)、微管蛋白相关抗体(microtubule associated protein-2, MAP2)等也是与神经内分泌相关标志物，因前两种缺乏特异性临床病理诊断并不主张使用，而后一种抗体染色效果尚可，在小细胞癌中具有较好的敏感性，但无相关特异性评价数据，且缺乏在其他类型肺神经内分泌肿瘤中与突触素、CgA、CD56等推荐抗体的对比研究，目前并不常规使用。S-100蛋白不属于神经内分泌抗原，可以标记分化好的肺神经内分泌肿瘤细胞巢周围的支持细胞成分，也不作为常规推荐诊断肺神经内分泌肿瘤的抗体种类。有文献报道，CD117在小细胞癌表达率较高，但也有文献报道仅占40%左右小细胞癌表达，更有报道CD117亦表达于非小细胞肺癌中，因此目前国内外对此并无强烈推荐。以上标志物可选择应用。

四、胃肠胰神经内分泌肿瘤免疫组化标记物解读：：