猪体细胞克隆胚胎DNA甲基化和组蛋白乙酰化重编程的研究

负责人:张运海

依托单位:安徽农业大学

批准年份:2007

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项目简介
项目名称
猪体细胞克隆胚胎DNA甲基化和组蛋白乙酰化重编程的研究
项目批准号
30700574
学科分类
C120103 生命科学部 _发育生物学与生殖生物学 _发育生物学 _合子激活与胚胎早期发育
资助类型
生命科学
负责人
张运海
依托单位
安徽农业大学
批准年份
2007
起止时间
200801-201012
批准金额
18.00万元
摘要
包括DNA甲基化和组蛋白修饰在内的表观遗传修饰是调控正常生殖与发育的重要机制。本课题以猪自然繁殖的体内胚、体外受精胚为对照,研究了猪体细胞克隆胚着床前DNA甲基化和组蛋白修饰的重编程变化;探讨了表观修饰剂处理对猪克隆胚早期发育的影响。发现有高达50%的克隆早期囊胚、86%的晚期克隆囊胚的DNA甲基化水平与同期体内自然繁殖胚的DNA甲基化水平有显著差异。用25-50nM的Trichostatin A处理克隆胚24-36h,可能是通过影响2细胞期克隆胚组蛋白乙酰化及囊胚期DNA甲基化程度促进了囊胚形成;发现H3K27me3有可能参与了体内胚囊胚期及之后谱系分化启动,H3K4me3可能在猪胚胎基因组活化事件中起一定作用;成功诱导出猪的iPS,但iPS克隆胚发育率显著下降。将每生产100枚克隆胚用时缩短了4h;对猪卵母细胞体外成熟、激活,胚胎生产、培养,供体细胞培养、准备等若干环节进行了优化、集成,将源于梅山猪体细胞的克隆胚移植5头受体,有1头怀孕期满后产下4只健康、活泼的克隆梅山猪仔猪。上述结果有助于加深我们对体细胞克隆重编程的认识,为提高克隆效率奠定理论和技术基础。
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