项目简介
项目名称
定点突变研究黄精凝集素II结构与功能关系
项目批准号
30270331
学科分类
C050204
生命科学部
_生物物理、生物化学与分子生物学
_生物化学
_糖生物化学
资助类型
生命科学
负责人
鲍锦库
依托单位
四川大学
批准年份
2002
起止时间
200301-200512
批准金额
20.00万元
摘要
运用生物信息学方法分析黄精凝集素II糖结合位点相关氨基酸对凝集素功能影响的基础上,对黄精凝集素II甘露糖结合位点进行了突变及回复突变，同时对分子中保守的二硫键进行了突变;将各种突变体进行表达和亲和层析纯化,运用圆二色谱、荧光光谱、荧光偏振光谱、紫外差别光谱等光谱学手段研究了相关突变体和回复突变体构象的变化以及与甘露糖、唾液酸结合能力的变化.对突变蛋白进行细胞凝集活性以及抗艾滋病毒活性分析，并与天然蛋白和重组天然蛋白进行活性比较。第一个甘露糖结合位点的突变导致凝集素结合甘露糖活性丧失，但保留唾液酸结合能力，同时抗HIV活性大幅降低；第二、第三结合位点的回复突变表明凝集素甘露糖结合能力升高，HIV抗性增强。运用AutoDocking软件对黄精凝集素的唾液酸结合位点进行了预测模拟，发现凝集素分子中存在三个可能的唾液酸结合位点，其中近C－端位点由于亚基间相互作用可能失去结合能力。这是首次发现单子叶甘露糖结合凝集素具有唾液酸结合活性并对相关位点进行预测。
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