高等真核生物细胞中监测自噬试验方法的解释与使用指南（下）
2016-12-29 MedSci MedSci原创
B 通过通量的方法监测自噬自噬不仅仅包括Atg8/LC3的合成和脂化，以及自噬体的形成，更重要的是通量，或者说是整个系统中的流体，包括溶酶体和液泡。因此，自噬的底物需要被监测已确定它们到达过这个细胞器，并且在适当的时候降解。1. 自噬性蛋白质的降解 蛋白质降解分析代表了一种测量自噬通量的行之有效的方法，并且能够很好的量化。一般的策略是用放射性的氨基酸（如[14C]-亮氨
第一部分见：高等真核生物细胞中监测自噬试验方法的解释与使用指南（上）B 通过通量的方法监测自噬自噬不仅仅包括Atg8/LC3的合成和脂化，以及自噬体的形成，更重要的是通量，或者说是整个系统中的流体，包括溶酶体和液泡。因此，自噬的底物需要被监测已确定它们到达过这个细胞器，并且在适当的时候降解。1. 自噬性蛋白质的降解 蛋白质降解分析代表了一种测量自噬通量的行之有效的方法，并且能够很好的量化。一般的策略是用放射性的氨基酸（如[14C]-亮氨酸或 [14C]-缬氨酸）标记蛋白，最好是相对较长的一段时间，以达到代表自噬底物最好的长寿命蛋白质得到充分标记的目的，随后经过一个长的冷冻过程以确保检测开始时被标记的短寿命蛋白质已经被降解了。下一步，测量来自未受损的细胞中或被灌注的器官中标记蛋白的酸溶液的放射性依赖于时间的释放。然而测量的降解中的一部分与自噬无关，所以必须在3-MA或者是氨基酸抑制自噬的浓度下进行平行测量；然后从总测量值里减去这一部分。互补的办法是使用阻断其它降解途径的化合物，如蛋白酶抑制剂，由于不同降解系统间的干扰可能产生意想不到的结果。例如阻断蛋白酶功能可以刺
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