Nat Methods：科学家首次证实CRISPR-Cas9对人类细胞靶向效应的准确性
2015-02-12 佚名 生物谷
近日，一篇发表在国际杂志Nature Methods上的研究论文中，来自首尔大学的研究人员通过研究证实了CRISPR-Cas9的确对人类细胞具有准确的靶向效应。近些年来CRISPR-Cas9系统成为了一大热门研究，很多科学家利用CRISPR-Cas9作为一种工具来开发抗癌细胞疗法或者去修饰导致干细胞和体细胞发生遗传的遗传缺陷。然而并没有可靠敏感的方法来测定全基因组中CRISPR-Cas9的准确性，
近些年来CRISPR-Cas9系统成为了一大热门研究，很多科学家利用CRISPR-Cas9作为一种工具来开发抗癌细胞疗法或者去修饰导致干细胞和体细胞发生遗传的遗传缺陷。然而并没有可靠敏感的方法来测定全基因组中CRISPR-Cas9的准确性，因此应用CRISPR-Cas9的安全性目前还是一个问题。当然研究者也表示这很难消除CRISPR-Cas9诱导脱靶序列产生突变的可能性，而脱靶序列往往和靶向作用的序列具有一定的相似性，在肿瘤抑制基因中脱靶序列常常会引发癌症。
文章中，研究者开发了一种名为Digenome-seq的新技术，其可以通过基因组测序的方式来对CRISPR-Cas9诱发的脱靶序列和靶向序列的突变进行定位；研究人员在检测管中利用Cas9核酸酶对人类基因组DNA进行了消化，随后进行了全基因组测序，体外消化会在脱靶和靶向序列中产生特定的模式，而这种模式可以通过计算来确定。研究者表示，通过往组成CRISPR-Cas9的单一引导RNA的末端添加鸟嘌呤核苷酸，我们就可以成功开发出一种高度可编程的核酸酶，其对于人类基因组并不会产生脱靶效应。
研究者Jin-Soo Kim博士说道，如果CRISPR-Cas9可以缩短脱靶序列，那么或许就会产生意想不到的突变，而一旦我们证实了CRISPR-Cas9的准确性，那么这对于开发治疗疾病的基因疗法或细胞疗法将会带来非常大的推动作用。
原始出处:
Kim D1, Bae S1, Park J2, Kim E3, Kim S3, Yu HR3, Hwang J4, Kim JI5, Kim JS1.Digenome-seq: genome-wide profiling of CRISPR-Cas9 off-target effects in human cells.Nat Methods. 2015 Feb 9. doi: 10.1038/nmeth.3284. [Epub ahead of print]
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