Clin Infect Dis :梅毒诊断的新标本：唾液中梅毒螺旋体DNA高负荷的证据

      尽管目前已经采取了许多策略来预防和控制梅毒，但这种有数百年历史的性传播疾病仍然是世界范围内的公共卫生问题。传染病的确证诊断主要依靠从临床标本中直接检测病原体。然而，梅毒病原体梅毒螺旋体亚种梅毒螺旋体(T.pallidum)的体外培养较为困难。暗视野显微镜仅对新的、潮湿的原发和继发病变有用，随着病变愈合或接受抗生素治疗，其敏感度降低。到目前为止，在梅毒患者中检测梅毒螺旋体仍然是一个挑战。

近年来发展了检测梅毒螺旋体DNA的PCR方法。梅毒螺旋体可以传播到几乎所有的组织和器官，通过PCR从各种生物标本中检测到梅毒螺旋体DNA，如皮损、血液、脑脊液、尿液和精液。最近，几个案例提供了令人信服的证据，证明嘴对嘴转移预先咀嚼的食物或接吻也可能导致梅毒螺旋体的传播。先前的一项研究还表明，梅毒患者口腔拭子中梅毒螺旋体DNA的检出率率很高。令人惊讶的是，几乎40%来自没有可见口腔病变的患者的口腔拭子含有梅毒螺旋体DNA。这些研究表明，唾液也可以作为检测梅毒螺旋体DNA的一种有用的生物样品。为了全面调查梅毒患者唾液中是否存在梅毒螺旋体DNA，我们该研究招募了所有梅毒阶段的患者。采用巢式聚合酶链反应(NPCR)和滴状数字聚合酶链反应(DdPCR)检测所有受试者唾液和血浆中梅毒螺旋体DNA，并监测治疗前后梅毒螺旋体DNA的动态变化。

方法

     234例不同时期梅毒患者和30例志愿者。所有参与者都采集了成对的唾液和血浆样本。治疗后每4小时采集9例患者的连续唾液样本。以PolA和Tpp47为靶点，采用巢式PCR和液滴数字PCR检测样品中的梅毒螺旋体DNA。

结果

     一期梅毒唾液和血浆中梅毒螺旋体的检出率分别为31.0%(9/29)和51.7%(15/29)，二期梅毒分别为87.5%(63/72)和61.1%(44/72)，潜伏梅毒分别为25.6%(21/82)和8.5%(7/82)(p=0.004)，21.6%(11/51)和5.9%(3/51)。梅毒患者唾液中Tpp47和PolA的载量中位数分别为627拷贝/ml(0~101200拷贝/ml)和726拷贝/ml(0117260拷贝/ml)。而在血浆中，Tpp47和Pola的载量很低，中位数分别为0拷贝/ml(范围0-149.6拷贝/ml)和中位数0拷贝/ml(范围0176拷贝/ml)。治疗期间唾液中梅毒螺旋体DNA载量呈下降趋势，其清除时间与治疗前梅毒螺旋体DNA载量呈正相关。

  开发一种方便、非侵入性的大规模样本采集方法，对梅毒的预防具有重要意义。唾液样本无疑提供了这样的便利。结果表明，梅毒患者唾液中均可检出梅毒螺旋体DNA，除一期梅毒外，唾液中梅毒螺旋体DNA的检出率明显高于血浆中梅毒螺旋体DNA的检出率。有研究表明在唾液中可以检测到大量病原体的核酸。唾液检测被认为比血清检测人类疱疹病毒、巨细胞病毒和带状疱疹病毒更敏感。在这里，二期梅毒的梅毒螺旋体DNA检出率为87.5%，高于先前的一项研究，该研究从二期梅毒患者的口腔拭子样本中检出64.5%的梅毒螺旋体DNA。唾液是一种更敏感的诊断液的可能性是合理的，因为唾液是系统来源的储存库。

     病原体主要通过以下途径进入唾液：1)通过唾液或其他感染者的病原体直接传播；2)通过唾液腺通过血液传播感染；3)通过口腔粘膜感染；以及4)血清渗出物。结果显示在267名参与者中，238名有口交，22名有口腔溃疡，但7名未报告口交的患者在口腔拭子中也检测到梅毒螺旋体DNA阳性。该研究表明，口腔中的梅毒螺旋体可能不仅与口交或口腔病变有关，还可能与感染途径有关，如经唾液腺的血液感染或血清渗出物。有趣的是，该研究中大多数患者没有口交报告，而且在唾液中检测到流行的梅毒螺旋体DNA。二期梅毒、血液≥滴度1：32、血浆梅毒螺旋体DNA阳性与唾液梅毒螺旋体DNA检出率显著相关，提示梅毒螺旋体血症患者口腔内可检出梅毒螺旋体DNA。

       一期梅毒患者唾液中梅毒螺旋体DNA的检出率与血浆中梅毒螺旋体DNA的检出率无显著性差异。然而，一个有趣的发现是，一期梅毒患者唾液中梅毒螺旋体DNA的检出率随着血液RPR滴度的升高而升高。当血液RPR滴度较低(0~8)时，53.8%的患者血浆中检出梅毒螺旋体DNA，而唾液中几乎检测不到梅毒螺旋体DNA。当血液RPR滴度较高时，唾液中梅毒螺旋体DNA的检出率为71.4%。这一发现表明梅毒螺旋体可能首先进入血液，然后在感染后传播到口腔。唾液可能会浓缩并储存梅毒螺旋体，就像贮藏者一样。

      梅毒可在性行为中通过破损皮肤或粘膜直接接触而传播。然而，本研究发现梅毒患者唾液中梅毒螺旋体DNA载量较高，提示唾液可能是梅毒的另一种传播途径。对于二期梅毒来说，这并不难理解，因为之前的研究报告称，临床上嘴对嘴转移预先咀嚼的食物或与二期梅毒患者接吻的病例导致了梅毒螺旋体的感染。令人惊讶的是，潜伏期梅毒和症状性神经梅毒患者唾液中梅毒螺旋体DNA含量较高(最高分别为3212拷贝/ml和2728拷贝/ml，远高于血液中的含量)。如果潜伏期或晚期梅毒患者的唾液可能具有传染性，那么预防梅毒的策略应该得到重新考虑。

      该研究表明，唾液中梅毒螺旋体DNA的检出率明显高于血浆中梅毒螺旋体DNA的检出率。唾液标本具有方便、无创等优点，不仅可作为梅毒的敏感诊断液，而且可作为梅毒疗效的指标监测梅毒DNA清除率的一种很有前途的方法。

文献来源：Wang C,  Hu Z,  Zheng X, A new specimen for syphilis diagnosis: Evidence by high loads of Treponema pallidum DNA in saliva.Clin Infect Dis 2020 Oct 25