ABO血型鉴定方法

01 ABO血型分类

A: 红细胞中含A抗原、血清中含抗B抗体

B: 红细胞中含B抗原、血清中含抗A抗体

AB:红细胞中含A抗原、B抗原血清中无抗体

O：红细胞中无抗原、血清中含抗A和抗B抗体

02 ABO血型检测原理

血型抗原与相应抗体在反应介质中形成红细胞和相应血型抗体结合的免疫复合物，出现肉眼可见的凝集现象。分为正向定型和反向定型。正向定型指已知的特异性抗体（标准血清）检查红细胞的未知抗原。反向定型指已知的血型的标准红细胞检查血清中的未知抗体。

ABO血型鉴定方法

1.盐水介质法(salt medium test)

原理：根据IgM类抗体与红细胞膜上特异性抗原能发生凝集反应。

正定型:已知血型抗体试剂+红细胞

鉴定红细胞上血型抗原

反定型:已知标准红细胞+血清

鉴定血清中抗体

反应条件:生理盐水介质，室温，肉眼可见凝集反应。

平板法，试管法，微孔板法，试管离心法最可信赖。

应用: ABO血型定型、RhD抗原定型

(IgG+IgM, IgM单克隆抗体)，交叉合血

结果判断：

2.玻片法

实验材料：

1)诊断用抗A及抗B单克隆抗体试剂各一支。

2)玻片、无菌刺血针、消毒用碘酒、酒精、无菌棉签、牙签，记号笔等。

实验方法

1)取洁净玻片一张用蜡笔分成两半，分别标记A、B，然后A侧滴一滴抗A抗体（蓝色)，B侧滴一滴抗B抗体（黄色)。

2）被检者耳垂或手指用碘酒消毒，酒精脱碘并凉干后，用刺血针刺血。

3）用牙签刮取两滴血液充分与两种抗体混匀，即可观察结果

实验结果

血型鉴定结果

注意事项

1.A、B两侧不能混，否则结果不可靠。

2.无菌观念：消毒按一定方向，以一点为中心，由内向外；注意酒精脱碘，否则损伤皮肤、色素沉着；酒精脱碘后，要晾干，否则进针会有烧灼疼痛。

3.流式细胞技术

实验步骤

（1）稀释: 将待测血样的红细胞用生理盐水稀释成百分之五的红细胞悬液。

（2）标记: 分装各管分别等比加入荧光素标记抗体，避光放置15min待受检红细胞上的血        型抗原与相应荧光标记抗体结合后，用生理盐水洗涤离心除去未结合抗体。

（3）检测: 重悬后立即用流式细胞仪检测与荧光标记抗体结合的红细胞，通过软件分析，        从而得到待测样本的红细胞血型。

优势

• 在细胞分型方面具有速度快、灵敏度高、特异性好，检测结果准确，重复性好的优点。

• 特别适合应用于ABO血型亚型的快速鉴定。

• 目前有研究指出流式细胞技术亦可通过分离孕妇血液中的胎儿红细胞用于产前非侵入性胎儿血型检测。

质量控制

1）标准血清

①要求:新鲜，在有效期内，效价高，凝集力强，严防污染。

②常用的抗血清有:人血清ABO血型抗体:稳定性高，已灭活补体。

人ABO血型单克隆抗体:稳定性较人血清抗体的稳定性

2)被检红细胞

i)标本新鲜，严防污染。

ii)某些疾病出现假凝集，可加做自身血清和红细胞，自身红细胞和生理盐水对照试验及结合反定型结果进行鉴定。

iii)当疑有血浆成分干扰血型鉴定时可用生理盐水反复洗涤红细胞以除干扰。

3）试验器材

i)器材清洁、干燥、标记清楚。

ii)用试管法定型时，应同时进行正向和反向定型。须设置对照。

iii)红细胞浓度按要求配置，红细胞与相应抗体的比例适当。

iiii)弱A亚型和弱B亚型，肉眼判断必同时须用显微镜复查。