项目简介
项目名称
高表达氨代谢双通路关键酶的HepG2细胞筛选及功能研究
项目批准号
30972926
学科分类
H0318
医学科学部
_消化系统
_肝再生、肝保护、肝衰竭、人工肝
资助类型
医学科学
负责人
唐南洪
依托单位
福建医科大学
批准年份
2009
起止时间
201001-201212
批准金额
30.00万元
摘要
前期研究表明，可用于生物人工肝系统的肝癌细胞株HepG2的氨代谢功能不足，原因在于氨代谢两条通路上的关键酶- - - - 人谷氨酰胺合成酶（hGS）、人精氨酸酶I（hArgI）和人鸟氨酸转氨酶（hOTC）表达低下或缺失。本研究通过克隆hGS、hArgI和hOTC的cDNA并通过双基因表达载体分别将hGS与hArgI或hOTC基因导入HepG2细胞、hArgI和hOTC基因导入HepG2-hGS或HepG2-AFhGS细胞（前期构建），筛选培养抗性细胞株。利用基因芯片技术分析转hGS、hArgI和hOTC基因对HepG2细胞基因表达谱的影响，定量PCR、Westernblot和生化酶学分析氨代谢酶的表达以及对氨代谢能力的影响，分析细胞增殖、周期和凋亡的改变；从中选择降氨功能最强最稳定的细胞株，微载体聚集培养后组装于混合型生物人工肝系统并进行肝衰模型的治疗，评价其应用价值。
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