Exp Ther Med:转染人BMP-2和EGFP重组腺病毒可增强兔骨髓间充质干细胞的成骨作用
2018-11-08 MedSci MedSci原创
骨髓间充质干细胞(BMSCs)是骨组织工程中最重要的种子细胞。本研究旨在探讨兔BMSCs转染人BMP-2和EGFP重组腺病毒后在成骨过程中的潜力。分离兔BMSCs,通过流式细胞仪检测表面干细胞标志物,包括CD29、CD44和CD45。采用逆转录-定量聚合酶链反应和Western blot分析检测BMSCs中BMP-2 mRNA和蛋白的表达。成骨培养基诱导后,使用ALP活性试剂盒,免疫组织化学染色和
骨髓间充质干细胞(BMSCs)是骨组织工程中最重要的种子细胞。本研究旨在探讨兔BMSCs转染人BMP-2和EGFP重组腺病毒后在成骨过程中的潜力。
分离兔BMSCs,通过流式细胞仪检测表面干细胞标志物,包括CD29、CD44和CD45。采用逆转录-定量聚合酶链反应和Western blot分析检测BMSCs中BMP-2 mRNA和蛋白的表达。成骨培养基诱导后,使用ALP活性试剂盒,免疫组织化学染色和茜素红S染色,分别检测第7天的碱性磷酸酶(ALK)活性,第14天的I型胶原和第21天的钙结节。通过蛋白质印迹分析检测与Wnt信号传导通路相关的蛋白质的表达水平。
结果显示,CD29,CD44和CD45的阳性率分别为62.92±1.99,93.55±0.99和0.21±0.12%。在Ad-BMP-2/EGFP转染的BMSCs中BMP-2 mRNA和蛋白的表达显著上调。此外,Ad-BMP-2/EGFP诱导ALP活性,促进兔BMSCs中I型胶原和钙结节形成的产生。在Ad-hBMP-2/EGFP转染的BMSCs中,β-连环蛋白、细胞周期蛋白D1、Runx2和c-myc的水平上调,而GSK3β的水平显著降低。结果还表明,Ad-hBMP-2/EGFP过表达BMP-2,通过刺激Wnt信号通路,促进β-catenin的积累和GSK3β的抑制,提高了兔BMSCs的成骨分化能力。预期Ad-hBMP-2/EGFP转染的兔BMSCs是骨组织工程中的良好种子细胞。
原始出处:
Wu CC, Wang F, Enhancement of osteogenesis of rabbit bone marrow derived mesenchymal stem cells by transfection of human BMP-2 and EGFP recombinant adenovirus via Wnt signaling pathway. Exp Ther Med. 2018 Nov;16(5):4030-4036. doi: 10.3892/etm.2018.6735. Epub 2018 Sep 13.
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