J Allergy Clin Immunol:接触性致敏物和神经激肽-1受体拮抗剂抑制变应性接触性皮炎

背景：变应性接触性皮炎(CD)是一种慢性炎症性皮肤病，由偏向1型获得性免疫引起，目前对抗原(Ag)特异性免疫治疗的需求尚未得到满足。暴露于皮肤敏感剂可刺激促炎神经肽P物质和血激肽1的分泌，它们通过神经激肽-1受体(NK1R)发出信号，促进CD的先天和获得性免疫反应。因此，缺乏NK1R的小鼠会出现CD受损。尽管如此，靶向NK1R在CD中的作用和治疗仍有待阐明。

目的：我们试图建立一种抗原特异性免疫抑制方法，通过将半抗原和NK1R拮抗剂整合到可溶解微针阵列(MNA)中，通过皮肤共传递治疗CD。

方法：采用在体小鼠接触性超敏反应模型和体外人皮肤模型，研究NK1R信号转导途径的作用和机制，以及接触性增敏剂NK1R拮抗剂MNA对CD的免疫抑制作用。

结果：我们在小鼠中证实了CD需要通过P物质和血激肽1传递NK1R信号。角质形成细胞和树突状细胞中NK1R的特异性缺失，而肥大细胞中的NK1R特异性缺失阻止了CD的发生。皮肤共传递半抗原或抗原MNA可抑制神经肽介导的皮肤炎症反应，促进抗原特异性效应T细胞的缺失，并增加调节性T细胞，以抗原特异性的方式防止CD的局部和全身复发。

图1.高效的CHS需要NK1R、SP和HK1。在WT和NK1RKO B6小鼠中，皮肤CHS对DNCB的作用是通过耳增厚来实现的。B，(A)中小鼠耳朵的显微图像，显示表皮-真皮厚度(线条)，角化过度，角化不全，棘皮病，白细胞炎性浸润。C、WT、Tac1KO、Tac4KO和Tac1/Tac4KO B6小鼠皮肤CHS到DNCB。D，(C)中具有代表性的小鼠耳朵的显微图像。Tac1/Tac4KO B6小鼠腹腔注射E，CHS至DNCB。在致敏过程中使用SP或HK1，或SP和HK1。F，(E)中小鼠耳朵的显微图像显示表皮-真皮厚度(线条)和白细胞渗出。在(A)、(C)和(E)中，示出了3的一个代表性实验。(A)每组6只；(B)和(C)每组5只。均数采用单因素方差分析和学生-纽曼-科尔斯检验。*P<.05，**P<.01，*P<.001，*P<.0001；NS，不显著。描述了耳部皮肤刺激后48小时所获得的值之间的统计比较。(B)、(D)和(F)中的图像来自诱导48小时后获得的样本。苏木素和曙红；原始放大倍数3200；刻度条5 20 mm。

图2.整合半抗原和NK1R拮抗剂的MNA的产生和测试。MNA的三维设计和几何参数。B、将微针应用于小鼠耳朵前(左)和后(右)的立体显微镜图像。刻度尺5 200 mm。中心，MNA交付的货物痕迹(虚线正方形)在老鼠耳朵上。刻度尺5 1 mm。活体动物荧光图像，一只小鼠耳朵皮肤上注射了MNA，显示了Alexa Fluor 488(左)和Alexa Fluor 555(右)。D，冰冻切片显示(左)两个MNA穿透区(方块)，相应的荧光显微镜图像显示Alexa Fluor 488(绿色)和Alexa Fluor 555(红色)进入皮肤层。原始放大倍数3100；比例尺5 40 mm。用负载DNBS的MNA致敏所致的CHS与外用DNCB相比。每个点代表一只鼠标。F，比较DNCB加NK1R拮抗剂注射致敏小鼠的CHS。或使用DNBS-NK1R拮抗剂-MNA。在(E)和(F)中，显示了3个具有代表性的实验，每组5只小鼠。均数6SD采用单因素方差分析，然后进行学生-纽曼-Keuls检验。*P<.001，*P<.0001；NS，不显著。耳部皮肤刺激后48小时各测定值的统计学比较。

图3.整合在MNA中的DNBS和NK1R拮抗剂抑制半抗原诱导的小鼠和人皮肤炎症。A，WT B6小鼠在MNA致敏后的炎症(按耳朵厚度)；所示为5个代表性实验中的1个，每组5只。B，(A)中小鼠耳朵的显微图像显示表皮-真皮厚度(线条)和白细胞渗出。苏木素和曙红；原始放大倍数3200；刻度条5 20 mm。C、小鼠耳表皮厚和真皮厚度(A组)，每组5只。D，(A)中小鼠皮肤切片中炎性细胞的定量。平均每张皮肤切片6 1SD为20个显微高倍视野(原始放大倍数340)；所示为3个实验中的1个代表性实验，每组5只小鼠。小鼠耳组织中IL-1b和IL-6转录本含量。F、小鼠耳组织中IL-1b、IL-6含量。在(E)和(F)中，示出了3的一个代表性实验。经MNAs处理的人皮肤中的G、IL-1b和IL-6转录本。每个点代表一个来自不同供者的皮肤样本；如图(G)所示为3。H，从皮肤样本中迁移的DC的量化；如(G)所示，1个具有代表性的实验。I，(G)所示的人皮肤动员的DC上人类白细胞抗原-DR、CD86、PD-L1和CD40的表达。(G)迁移DC上清液中IL-10和IL-12p70的浓度。均数采用单因素方差分析和学生-纽曼-科尔斯检验。*P<.05，**P<.01。*P<.001；NS，不显著。

结论：局部皮肤神经免疫网络的免疫调节作用可用于治疗CD等由1型免疫反应引起的皮肤病。

原文出处：Bandyopadhyay M,  Morelli AE,  Balmert SC,et al.Skin codelivery of contact sensitizers and neurokinin-1 receptor antagonists integrated in microneedle arrays suppresses allergic contact dermatitis.J Allergy Clin Immunol 2022 07;150(1)