J Surg Res：使用老年人和年轻人的富血小板血浆治疗小鼠压疮的比较研究
2023-12-12 将军的九分裤 MedSci原创 发表于上海
这项研究提示PRP在PU治疗中显示出强大的伤口愈合能力，年轻人的PRP优于老年人，因为其血小板浓度更高，生长因子的产量增加
压疮(PUs)是皮肤或皮下软组织的局部损伤，通常由强烈和/或长期的压力、剪切、摩擦或这些因素的组合引起。富血小板血浆(platelet-richplasma,PRP)是一种从全血中通过梯度离心提取的高浓度血小板的生物制品，已发展成为PUs的一种重要的治疗方式，其在皮肤伤口修复中的潜在机制包括解决伤口炎症、血管生成、伤口收缩和再上皮化。PRP可分为自体PRP和异体PRP，虽然自体PRP对脓毒症是有益的，但其应用也有一定的局限性，而从采血机构中获取在年轻人中制备的异基因PRP可以程序化且易于收集，可进一步扩大PRP技术的应用和推广。
这项研究建立小鼠背部脓肿动物模型，比较老年脓毒症患者血浆和青年献血者血浆的治疗效果。此外，还比较了老年患者和年轻人PRP的血小板浓度和PRP分泌生长因子的能力，为同种异体PRP治疗老年人压疮积累理论依据。
图1 小鼠背部压疮大体观察及病理改变。肉眼可见两个对称的圆形创面，表面有灰黄或黄褐色结痂(A)。全层组织缺失、皮下脂肪和肌肉(B)。HE染色显示表皮和真皮缺损，如黑色箭头所示;皮肤下胶原纤维呈波浪形排列，结构紊乱，断裂，如红色箭头所示;如黄色箭头所示，炎性细胞浸润，以中性粒细胞为主;空泡化结构由蓝色箭头(C)表示
图2 不同龄期PRP激活后释放的生长因子浓度比较。青年人PDGF、TGF-b、VEGF浓度高于老年人，具有统计学意义(B)。PRP激活后PDGF、TGF-b、VEGF浓度与全血血小板浓度(C)、PRP浓度(D)呈正相关
研究中采用全血制备PRP，并比较全血和PRP中血小板浓度。用酶联免疫吸附法测定活化的PRP释放的生长因子。将C57BL/6小鼠分为3组，即生理盐水对照组、老年prp组(A组)和青年prp组(B组)，在小鼠背部建立缺血再灌注损伤性脓液。在第0天、第5天和第10天拍摄脓块以评估其大小。第10天采集标本，进行苏木精、伊红和马尾松染色。免疫组化染色CD31评价血管形成，Transwell检测细胞侵袭。通过体外免疫荧光和Westernblotting分析PRP对TGF-b依赖的成纤维细胞活性和上皮-间充质转化的作用。
图3 (A)各组第0、5、10天的创面图像。(B)B组伤口闭合明显增强。*与PRP(A、B)组比较P<0.05;#与青年成人PRP组(B组)比较，P<0.05.
图4 (A)治疗后第10天对照组、A组、B组HE、Masson、免疫组化切片。(B)B组胶原含量显著升高(C)prp处理组血管密度显著升高，青壮年prp处理组(B组)血管密度显著升高。*P<0.05，与PRP组比较;#P<0.05，与青年成人PRP组比较。
研究结果发现，青壮年全血血小板浓度和PRP明显高于老年人。两组PRP治疗组PRP血小板富集系数相似。活化后，青壮年PRP产生的血小板源性生长因子、TGF-b和血管内皮生长因子水平显著高于老年人(P<0.05)。血小板源性生长因子、TGF-b、血管内皮生长因子浓度与全血及PRP中血小板浓度呈正相关。
图5 PRP对成纤维细胞emt相关蛋白水平的影响。
观察PRP对TGF-b、a-平滑肌肌动蛋白、波形蛋白和E-cadherin表达的调控作用。两种PRP处理组的创面愈合优于对照组，表现为表皮再化率更高，更高的胶原含量和皮肤纤维化，随着时间的推移血管形成也之间增多。B组创面愈合优于A组(P<0.05)。
总的来说，这项研究提示PRP在PU治疗中显示出强大的伤口愈合能力，年轻人的PRP优于老年人，因为其血小板浓度更高，生长因子的产量增加。
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