J Rheumatol：用二维蛋白质印迹技术在RA滑膜组织中筛选到新的瓜氨酸化蛋白

研究要点：

1.瓜氨酸化过程在RA自身免疫中有非常重要的地位。

2.研究者应用2-D WB检测方法，在RA患者的滑膜组织中发现了数种新的瓜氨酸化蛋白质。

在类风湿关节炎（RA）自身免疫过程中，瓜氨酸化（一种将精氨酸残基转化为瓜氨酸残基的反应）起到了重要的作用。来自山东医科大学的XIAOTIAN CHANG博士等人应用二维蛋白质印迹（2-D WB）分析法在RA患者滑膜组织中对新的瓜氨酸蛋白进行筛选。研究结果发表在2013年8月的 The Journal of Rheumatology（风湿病学杂志）上。研究者应用2-D WB检测方法，在RA患者滑膜组织中发现了一些新的瓜氨酸化蛋白质。【原文下载】

研究者从RA患者的滑膜组织（n=10）中提取总蛋白。制备四块相同的二维电泳（2-DE）凝胶，其中2块凝胶转膜在聚偏二氟乙烯膜上，分别与RA患者血清（n =10）或抗瓜氨酸抗体进行反应。将二维电泳凝胶的蛋白质谱与总体水平进行比较，用质谱法鉴定从2-DE凝胶得到的免疫反应性蛋白质点。同时在RA 血清和抗瓜氨酸抗体检测到的蛋白质被认为是瓜氨酸化蛋白质，并通过常规WB、免疫沉淀法和酶联免疫吸附法（ELISA）进一步证实。用ELISA法检测RA患者血清中针对这些潜在抗原的自身抗体。
应用2-D WB 方法，在RA患者血清中和抗瓜氨酸抗体反应均检测到α-1-抗胰蛋白酶（A1AT）、动力蛋白重链3、纤维蛋白原β链、角蛋白Ⅱ型表皮HB4（KRT84）、基膜聚糖、微管蛋白β链（TUBB）和波形蛋白。A1AT、KRT84及TUBB在RA患者的滑膜（n =5）中高表达；A1AT和KRT84在RA患者滑液（n =40）中高表达。滑膜组织中，A1AT、KRT84和TUBB的免疫沉淀物均表现出瓜氨酸化。与健康对照组（n =92）相比，RA患者（n =92）的血液中检测到高水平的抗KRT84自身抗体。

研究者应用2-D WB检测方法，在RA患者滑膜组织中发现了数种新的瓜氨酸化蛋白质。

研究背景：

类风湿关节炎（RA）是一种自身免疫性疾病。RA患者的血清中存在一系列的自身抗体，如类风湿因子（RF）、抗聚角蛋白微丝蛋白抗体、抗角质蛋白抗体、抗核周因子、抗波性蛋白及抗环瓜氨酸肽抗体等。

大部分RA自身抗体的B细胞自身表位包含瓜氨酸，一种精氨酸瓜氨酸化后的氨基酸。这种蛋白质修饰由钙依赖的肽酰基精氨酸脱亚胺酶催化，可引发包括自身抗体形成在内的免疫应答。因细胞损伤或非正常凋亡而引起抗原修饰，导致包括产生抗这些肽段或蛋白的自身抗体在内的免疫应答是最为普遍接受的RA肽段/蛋白瓜氨酸化分子机制。

ACPA是一种最近出现的敏感且特异的RA血清学标志物，在实验室检测中其表现优于RF检测。因此，瓜氨酸化在RA自身免疫中有非常重要的地位。有关在RA中筛选瓜氨酸化蛋白的报道很多。文献报道，数个蛋白的瓜氨酸化可以导致RA的自身免疫，例如聚角蛋白微丝蛋白、Ⅱ型纤维胶原、α-烯醇酶及波形蛋白等。然而，大多数研究的研究对象是RA患者的血样和滑液。

此项研究应用应用二维蛋白质印迹（2-D WB）分析法在滑膜和滑液中筛选瓜氨酸化蛋白，并用免疫沉淀、WB、ELISA等方法对其结果进行验证；并用ELISA方法确认RA患者血中是否存在抗候选蛋白的抗体，以鉴定RA患者滑膜组织中存在的瓜氨酸化蛋白。

原文下载

Chang X, Zhao Y, Wang Y, Chen Y, Yan X.Screening citrullinated proteins in synovial tissues of rheumatoid arthritis using 2-dimensional western blotting.J Rheumatol. 2013 Mar;40(3):219-27.